Next Ultra II RNA 非链特异性文库制备试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

Next Ultra II RNA 非链特异性文库制备试剂盒 |

该 Ultra II RNA 文库制备试剂盒专为非定向（非链特异性）RNA 建库设计，可显著提高 RNA 测序实验的灵敏度和特异性，并且可以降低 RNA 的起始用量。若与核糖体 RNA（rRNA）去除或 poly(A) mRNA 富集试剂盒相结合，该试剂盒均可从 10 ng 到 1 µg 的总 RNA 中制备高质量的文库。

有关定向（链特异性）RNA 文库制备，请参阅 NEBNext Ultra II RNA 链特异性文库制备试剂盒。

查看客户对 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒的评价。


特性

  • 文库产量极高，满足更多实验需求
  • 即便起始 RNA 量很低，也可制备高质量文库：
    • 10 ng – 1 µg 总 RNA（polyA mRNA 实验流程）
    • 10 ng – 1 µg 总 RNA（rRNA 去除实验流程）
  • 通过减少 PCR 循环获得最低的偏嗜性
  • 提高文库复杂度和转录本覆盖度
  • 通过精简的实验流程、减少的手动操作时间和自动化兼容性优化时间利用
  • 稳健可靠的表现
  • 与 NEBNext poly(A) mRNA 分离模块、rRNA 去除试剂以及多重测序接头和引物兼容

也提供含 SPRIselect® 磁珠的产品。

如需大量的 NEBNext Ultra II 性能数据，请点击上方“特性”中的链接，下载我们的 poly(A) mRNA 分离技术说明或 rRNA 去除技术说明。

如果与 NEBNext 多样本接头引物试剂盒 1（Unique 双端 Index 引物，UMI 接头，适用于 RNA）（NEB #E7416）组合使用，请参阅“操作说明”选项卡以了解 UMI 接头特定操作指南。

文库产量

图 1：使用 NEBNext Ultra II RNA 文库制备试剂盒对不同起始量 RNA 进行建库，均能得到最高的文库产量
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从人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中分离含有 Poly(A) 的 mRNA，并使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒（加上 NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块）和 Illumina TruSeq RNA 样本制备试剂盒 v2 制备文库。图中显示了 RNA 起始量和 PCR 循环数，也显示了来自三次平行实验的平均文库产量。

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重复率

图 2：NEBNext Ultra II RNA 与 NEBNext rRNA 去除试剂盒可降低重复率。
Next Ultra II RNA 非链特异性文库制备试剂盒 |
使用 NEBNext rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠）或 Illumina Ribo-Zero™ Gold rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠），从 1 μg、100 ng 和 5 ng 人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中去除核糖体 RNA。再分别使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒或 Illumina TruSeq RNA 文库制备试剂盒 v2 制备文库。仅使用 NEBNext 试剂盒测试了 5 ng 的起始量。文库在 Illumina NextSeq® 500 上采用双端模式（2×76 bp）测序。向下抽样 1,000 万个 read，并与 hg19 参考基因组进行比对。使用 RSeQC 的“Read Duplication”工具计算重复率，作为唯一比对 read 计算的一部分，其中比对到相同基因组位置的 read 被视为重复的 read。

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最大程度提高转录本覆盖度

图 3：NEBNext Ultra II RNA 文库可在转录本的整个基因体中实现均匀的覆盖度
Next Ultra II RNA 非链特异性文库制备试剂盒 |
从人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中分离含有 Poly(A) 的 mRNA，并使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒（加上 NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块）和 Illumina TruSeq RNA 样本制备试剂盒 v2 制备文库。图中显示了 RNA 起始量。文库在 Illumina® NextSeq® 500 上采用双端模式（2×76 bp）测序。RefSeq 转录本 5´ 到 3´ 覆盖度的图像显示，当 RNA 起始量从 1 μg 减少到 10 ng 时，Ultra II RNA 文库的覆盖度仍保持一致。在 TruSeq 试剂盒图中的明显变化是因为部分转录本的 3´ 端失去覆盖度。

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在低起始量下仍具有出色的文库复杂性

图 4：NEBNext Ultra II RNA 文库在低起始量条件下也可保留复杂性
Next Ultra II RNA 非链特异性文库制备试剂盒 |
使用 NEBNext rRNA 去除试剂盒（人/小鼠/大鼠）和推荐量的 ERCC RNA Spike-In Mix I（Thermo Fisher Scientific #4456740），从 1 μg、100 ng 和 5 ng 人类通用参考 RNA（Agilent #740000）中去除核糖体 RNA，然后使用 NEBNext Ultra II RNA 试剂盒制备文库。文库在 Illumina NextSeq® 500 上采用双端模式（2×76 bp）测序。使用 Salmon 0.4.0 对所有 ERCC 转录本进行 read 比对和定量分析。图中显示了线性匹配的 R2 值。转录本的 TPM（每千碱基百万转录本）相关性分析表明，Ultra II RNA 文库（A），包括 ERCC 转录本（B）的不同起始量之间均存在出色的转录本表达相关性。

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产品类别:
RNA Library Prep for Illumina

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E7770S     -20    
        NEBNext® Ligation Enhancer E7374AVIAL -20 1 x 0.024 ml Not Applicable
        NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer E7421AVIAL -20 1 x 0.192 ml Not Applicable
        Random Primers E7422AVIAL -20 1 x 0.048 ml Not Applicable
        NEBNext Second Strand Synthesis Enzyme Mix E7425AVIAL -20 1 x 0.096 ml Not Applicable
        NEBNext Second Strand Synthesis Reaction Buffer E7427AVIAL -20 1 x 0.192 ml Not Applicable
        Nuclease-free Water E7764AVIAL -20 1 x 1.25 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II End Prep Enzyme Mix E7646AVIAL -20 1 x 0.072 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II End Prep Reaction Buffer E7647AVIAL -20 1 x 0.168 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra™ II Ligation Master Mix E7648AVIAL -20 1 x 0.72 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II Q5® Master Mix E7649AVIAL -20 1 x 0.6 ml Not Applicable
        NEBNext First Strand Synthesis Enzyme Mix E7761AVIAL -20 1 x 0.048 ml Not Applicable
        NEBNext® Adaptor Dilution Buffer E7762AVIAL -20 1 x 2.4 ml Not Applicable
        (0.1X) TE Buffer E7763AVIAL -20 1 x 2.78 ml Not Applicable
    • E7770L     -20    
        NEBNext® Ligation Enhancer E7374AAVIAL -20 1 x 0.096 ml Not Applicable
        NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer E7421AAVIAL -20 1 x 0.768 ml Not Applicable
        Random Primers E7422AAVIAL -20 1 x 0.192 ml Not Applicable
        NEBNext Second Strand Synthesis Enzyme Mix E7425AAVIAL -20 1 x 0.384 ml Not Applicable
        NEBNext Second Strand Synthesis Reaction Buffer E7427AAVIAL -20 1 x 0.768 ml Not Applicable
        Nuclease-free Water E7764AAVIAL -20 1 x 5.7 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II End Prep Enzyme Mix E7646AAVIAL -20 1 x 0.288 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II End Prep Reaction Buffer E7647AAVIAL -20 1 x 0.672 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra™ II Ligation Master Mix E7648AAVIAL -20 3 x 0.96 ml Not Applicable
        NEBNext® Ultra II Q5® Master Mix E7649AAVIAL -20 2 x 1.2 ml Not Applicable
        NEBNext First Strand Synthesis Enzyme Mix E7761AAVIAL -20 1 x 0.192 ml Not Applicable
        NEBNext® Adaptor Dilution Buffer E7762AAVIAL -20 1 x 9.6 ml Not Applicable
        (0.1X) TE Buffer E7763AAVIAL -20 1 x 11.5 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • NEBNext 单样本或多样本接头引物试剂盒（NEB.cn/oligos）或用户自备接头引物
    • 磁力架或磁力板（例如 NEBNext® 磁性分离架，NEB #S1515S；Alpaqua® 96S Super Magnet Plate 磁性分离板，#A001322；或类似产品）
    • 80% 乙醇（新鲜制备）
    • 热循环仪
    • NEBNext Poly(A) mRNA 磁性分离模块（NEB #E7490）
      或 NEBNext® rRNA 去除试剂盒 v2 – 人/小鼠/大鼠（NEB #E7400 或 NEB #E7405）
      或 NEBNext® Globin RNA & rRNA 去除试剂盒 – 人/小鼠/大鼠（NEB #E7750 或 NEB #E7755）
      或 NEBNext® rRNA 去除试剂盒 – 细菌（NEB #E7850 或 NEB #E7860）
      或 NEBNext® RNA 去除主要试剂套装（NEB #E7865 或 NEB #E7870）
      或 NEBNext rRNA 去除试剂盒 – 人/小鼠/大鼠（NEB #E6310 或 NEB #E6350）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Where can I find protocols for using NEBNext® RNA Library Prep reagents?

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE7770_E7775

  • 应用实例

    • TechNoteNEBNextUltraIINonDirectionalRNApolyA
    • TechNote_NEBNext_Ultra_II_NonDirectional_rRNA_Depletion
    • Improving NGS library performance with lower input amounts using the NEBNext® Ultra™ II RNA Library Prep Kit for Illumina (non-directional)
    • Improving NGS library performance with lower input amounts using the NEBNext® Ultra™ II RNA Library Prep Kit for Illumina® (non-directional)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is the Monarch Total RNA Miniprep Kit compatible with NEBNext reagents for RNA Library Prep?
    2. What is the difference between the NEBNext Ultra II RNA Library Prep Kit (NEB #E7770) and the original NEBNext Ultra RNA Library Prep Kit (NEB #E7530)?
    3. What is the starting material I need to use when preparing libraries using the NEBNext Ultra II Directional RNA kit?
    4. Which kit can I use to isolate Poly (A) mRNA from Total RNA?
    5. Which kit can I use to deplete ribosomal RNA (rRNA) from human, mouse or rat RNA?
    6. Does the kit include adaptor and primers?
    7. Is it possible to reduce the volume of beads added during the second strand synthesis cleanup step of the protocol for E7760, E7765, E7770, and E7775?
    8. Which NEBNext Oligos can be used with this library prep kit?
    9. Can I use this NEBNext kit with adaptors and primers from other vendors than NEB?
    10. What do I do if I see a precipitate in the Ultra II End Prep Reaction Buffer?
    11. Is it possible to reduce the volume of beads added during the second strand synthesis cleanup step?

  • 问题解决指南

    • NEBNext® RNA Library Prep Kit Troubleshooting Guide (NEB #E7760, E7765, E7770, E7775, E7420, E7530)