9°N™ DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

9°N™ DNA 连接酶是具有热稳定性的连接酶，可催化两条相邻 DNA 链的 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基末端之间形成磷酸二酯键，这两条 DNA 链需要与互补 DNA 链进行杂交和准确互补配对，且没有缺口。9°N DNA 连接酶使用 ATP 作为辅因子，在更高的温度（45℃ – 70℃）下具有活性。

产品来源

从大肠杆菌菌株中纯化获得，携带有克隆自极端嗜热海洋古菌（marine archaea）热球菌（Thermococcus）属（菌株 9°N）的连接酶基因。古菌分离自赤道以北东太平洋海隆处 2500 米深的海底火山口（1）。

产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
Cloning Ligation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0238S     -20    
        9°N™ DNA Ligase M0238SVIAL -20 1 x 0.063 ml 40,000 units/ml
        9°N DNA Ligase Reaction Buffer B0238SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    （粘性末端单位）1 单位是指在 45℃ 条件下，当总反应体积为 50 µl 时，15 分钟能连接 50% 的 1 µg BstEII 酶切 λ DNA 的 12 碱基对粘性末端所需的酶量。一个粘性末端单位相当于一个切刻闭合单位（1）。

    反应条件

    1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 45°C

    1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液
    1 mM Tris-HCl
    (pH 7.5 @ 25°C)

    使用浓度

    40,000 units/ml

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml Recombinant Albumin
    50% Glycerol
    10 mM ammonium sulfate
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液和 20 µg/ml BstEII 酶切 λ DNA，反应体积为 50 µl。在 45℃ 下温育 15 分钟后，通过添加停止酶促反应的染料（50% 甘油，50 mM EDTA 和溴酚蓝）来终止反应，在 70℃ 下加热 10 分钟，然后上样到 0.7% 的琼脂糖凝胶上。由于存在连接酶，BstEII 酶切 λ DNA 的粘性末端将在 70℃ 热处理后保持在一起。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 使用连接酶检测反应和连接酶链式反应进行等位基因特异性基因检测（2,4）。
    • 在 PCR 扩增过程中掺入磷酸化寡核苷酸进行突变（5）。

  • 注意事项

    1. 9°N DNA 连接酶不能替代 T4 DNA 连接酶。粘性末端单位相当于 Barany 等人提出的切刻闭合单位。
    2. 在 1X 9°N DNA 连接酶反应缓冲液中以 45℃ 温育 DNA 和酶 15 分钟；或在热循环仪中温育 DNA 和酶，温育程序适用于 Barany 在《Genetic Disease Detection and DNA Amplification Using Cloned Thermostable Ligase》（利用克隆的热稳定连接酶进行遗传病检测和 DNA 扩增）（1991 年）中描述的反应。Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 189-193. 用 50% 甘油、50 mM EDTA、溴酚蓝的混合物终止反应。
    3. 9°N will not ligate short 4-base overlaps (typical of restriction enzyme digests), while it efficiently ligates 12-base pair overlaps.

  • 参考文献

    1. Thermococcus sp. (strain 9°N-7) isolated by Dr. Holger Jannasch (1991). Woods Hole Oceanographic Institute.
    2. Barany, F. (1991). Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 88, 189-193.
    3. Takahashi, M. et al. (1984). J. Biol. Chem.. 259, 10041-10047.
    4. Barany, F. (1991). TheLigase Chain Reaction in a PCR World. (pp. 5-16, Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory.
    5. Michael, S.F. (1994). Biotechniques. 16, 411-412.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for 9°N DNA Ligase (M0238)

  • 使用指南

    • Tips for Maximizing Ligation Efficiencies

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • Properties of DNA and RNA Ligases

  • Web 工具

    • NEBcloner®
    • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is LCR and which enzymes do you recommend?
    2. What is LDR and how does it differ from LCR?
    3. How can I design probes for LDR or LCR to maximize specificity?
    4. Do thermostable DNA ligases (such as Taq DNA Ligase, 9°N DNA Ligase, and HiFi Taq DNA Ligase) ligate sticky ends?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Tips for Ligation Reactions