固定化 T4 DNA 连接酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

T4 DNA 连接酶催化双链 DNA 或 RNA 中相邻的 5´ 磷酸末端和 3´ 羟基末端形成磷酸二酯键。T4 DNA 连接酶不仅能够连接平末端和粘性末端，还可以修补双链 DNA 和部分 DNA/RNA 杂交链中的单链切刻位点（1）。

固定化 T4 DNA 连接酶（又称 IM T4 DNA 连接酶）是包被有 T4 DNA 连接酶的磁珠悬浮液，以 10 mg/ml 浓度（50% 甘油）提供，每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位（CEU）。反应完成后，可借助磁力去除体系中的酶，因而酶可重复使用。

 

固定化 T4 DNA 连接酶在不同温度下的相对活性

温度

活性（%）

16℃

100%

25℃

100%

37℃

50%

固定化 T4 DNA 连接酶在不同 NEB 缓冲液中的活性

缓冲液

pH

活性（%）

NEBuffer r1.1

7.0

50%

NEBuffer r2.1

7.9

100%

NEBuffer r3.1

7.9

70%

rCutSmart 缓冲液

7.9

100%

phi29 DNA 聚合酶缓冲液

7.5

100%

标准 Taq 缓冲液

8.3

70%

ThermoPol 缓冲液

8.8

70%

Q5 反应缓冲液

8.5

10%

T4 DNA 连接酶缓冲液

7.5

100%

NEBNext 快速连接缓冲液

7.6

25%

 

图 1：固定化 T4 DNA 连接酶成功连接 HindIII 消化的 Lambda DNA 的产物

固定化 T4 DNA 连接酶 |

根据推荐方案，分别使用无连接酶、可溶性 T4 DNA 连接酶（NEB #M0202）、固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）连接 HindIII 消化的 Lambda DNA（NEB #N3012）的产物。结果显示，可溶性酶和固定化酶的连接效果一致。

图 2：固定化 T4 DNA 连接酶可重复使用

固定化 T4 DNA 连接酶 |

将固定化 T4 DNA 连接酶（NEB #M0569）加入到快速连接缓冲液，对 Nanopore 接头进行连续夹板序列连接。数据显示，经过 20 次连续连接反应后，酶活性仍不受影响。

产品类别:
DNA Ligases Products

应用:
Non-Cloning Ligation,
DNA Ligation,
Cloning Ligation

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0569S     -20    
        Immobilized T4 DNA Ligase M0569SVIAL -20 1 x 0.11 ml 10 mg/ml
        T4 DNA Ligase Reaction Buffer B0202SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    反应条件

    1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液

    1 T4 DNA 连接酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM ATP
    10 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    使用浓度

    10 mg/ml

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50 mM KCl
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ -20°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    单位活性检测条件

    产品以 10 mg/ml 浓度提供，每微升溶液的有效浓度为 60 粘性末端单位（CEU）。

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    • Nuclease-free Water

  • 注意事项

    1. ATP 是反应中必不可少的辅因子。这与需要 NAD 作为辅因子的 E. coli DNA 连接酶不同。
    2. 若 IM T4 DNA 连接酶不到总反应体积的 10%，按以下顺序建立反应体系：H2O、缓冲液、DNA，最后是酶。
    3. 如果 IM T4 DNA 连接酶超过总反应体积的 10%，建议按以下顺序建立反应体系：将底物制备在 1X 反应缓冲液中。将 IM T4 DNA 连接酶加入新反应管。将反应管置于磁力架上 3 分钟，使磁珠沉淀。然后小心地从磁珠沉淀中去除上清液，并将底物混合物添加到磁珠中。（在准备好组装反应之前，不要去除上清液，避免磁珠变干。）
    4. 如果温育时间超过 30 分钟，则需要混匀体系，确保磁珠保持悬浮状态。

  • 参考文献

    1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). P.D. Boyer(Ed.), 5, 3. San Diego: Academic Press.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Ligation of Fragments with Cohesive Ends using Immobilized T4 DNA Ligase (NEB #M0569)
    2. Protocol for Ligation of Fragments with Splinted or Cohesive Ends using Immobilized T4 DNA Ligase (NEB #M0569)

  • 应用实例

    • Generating Oligonucleotide Probes using Immobilized T4 DNA Ligase minimizes sample loss and saves time

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Ligase Selection Chart
    • Properties of DNA and RNA Ligases
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

  • Web 工具

    • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How should Immobilized T4 DNA Ligase (NEB #M0569) be stored and handled?
    2. How should I mix or resuspend Immobilized T4 DNA Ligase (NEB #M0569) beads prior to use?