核酸内切酶 III（Nth） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

E. coli 核酸内切酶 III（Nth）既有 N-糖基酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则切割 AP 位点的 3´ 端，产生一个 5´ 磷酸和一个 3´ 开环糖。被核酸内切酶 III 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲基乙内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二羟基胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲（1,2）。


产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自大肠杆菌的 nth 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0268S     -20    
        Endonuclease III (Nth) M0268SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml
        Endonuclease III (Nth) Reaction Buffer B0268SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 µl 总反应体系，含 10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链的 1X 核酸内切酶 III 反应缓冲液中，37℃ 条件下，1 小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。

    * AP 位点创建方法：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

    反应条件

    1X 核酸内切酶 III（Nth）反应缓冲液
    Incubate at 37°C

    1X 核酸内切酶 III（Nth）反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    1 mM EDTA
    1 mM DTT
    (pH 8 @ 25°C)

    使用浓度

    10,000 units/ml

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    250 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4

    热失活

    65°C for 20 minutes

    单位活性检测条件

    10 µl 总反应体系，含 1X 核酸内切酶 III（Nth）反应缓冲液、10 pmol 荧光标记寡核苷酸双链

  • 优势和特性

    应用特性

    • 单细胞凝胶电泳（彗星试验）（3,4,5）
    • 碱洗脱（6）
    • 碱解旋（7）

  • 注意事项

    1. 自 M0268S/L spec V2 生效后，NEB 更新了如下产品说明：
    2. 蛋白纯度测定（SDS-PAGE）： 通过 SDS PAGE 考马斯亮蓝染色分析检测，核酸内切酶 III（Nth）的纯度 ≥ 95%。
    3. qPCR 检测 DNA 污染（大肠杆菌基因组）：通过 SYBR® Green qPCR 和大肠杆菌 16S rRNA 特异性引物，检测至少 1 μl 核酸内切酶 III（Nth）中是否存在大肠杆菌基因组 DNA。利用纯化的大肠杆菌基因组 DNA 作标准曲线，进行定量分析。所测得的大肠杆菌基因组 DNA 污染水平不超过 1 个大肠杆菌基因组拷贝。
    4. 核酸内切酶活性（切刻）：为了与该系列产品的标准质量控制检测保持一致，已删除该项检测。

  • 参考文献

    1. Dizdaroglu, M., Laval, J. and Boiteux, S. (1993). Biochemistry. 32, 12105-12111.
    2. Hatahet, Z. et al. (1994). J. Biol. Chem.. 269, 18814-18820.
    3. Singh, N. et al. (1988). Exp. Cell Res.. 175, 184-191.
    4. Collins, A. et al. (1993). Carcinogenesis. 14, 1733-1735.
    5. Collins, A. et al. (1996). Environ. Health Perspect . 104, 465-469.
    6. Pflaum, M. et al. (1998). Free Rad. Res.. 29, 585-594.
    7. Hartwig, A. et al. (1996). Toxicol. Lett. 88, 85-90.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Comet Assay – Modified for Detection of Oxidized Bases Using the Repair Endonucleases Fpg, hOGG1 and Endonuclease III (Nth)

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer
    • DNA Damage and PreCR

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of Endonuclease III in the NEBuffer 1-4?
    2. What is the molecular weight of Endonuclease III?
    3. What types of damaged bases are recognized and removed by Endonuclease III?
    4. Is Endonuclease III a tagged protein?
    5. What substrate is used to test Endonuclease III activity?
    6. Will Endonuclease III work in rCutSmart buffer?