南极热敏 UDG |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

南极热敏 UDG （尿嘧啶-DNA 糖基酶）可催化含尿嘧啶的单链或双链 DNA 释放游离尿嘧啶。产生的缺嘧啶位点在高温和高 pH 下极易水解断裂。 该酶对高温敏感，在温度高于 50℃ 时便会迅速完全失活。

图 1： RT-qPCR 避免模板交叉污染的评估

南极热敏 UDG |

为了评估不同试剂盒对去除模板残留物的能力，首先使用 Luna 探针一步法 RT-qPCR 试剂盒制备含 U 的 RT-qPCR 产物。然后使用三种不同的 RT-qPCR 预混液（均包含 UDG），将~105 拷贝的含 U 产物作为模板进行 qPCR。参照厂商产品说明书，在第二个反应开始时进行 25℃ 温育，使 UDG 降解含 dU 样本，以降低其产生（假）阳性信号的能力。ΔCq 值是相同模板进行残留处理与未进行残留处理的循环数的差值。ΔCq 值越大说明去除残留产物的效率越高。使用 Luna 预混液去除污染后，一个样本中含 dU 产物被完全消化，从而导致ΔCq 值变大。注意：在真实污染案例中，污染的 DNA 量很难评估/预测。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜冷海洋细菌（psychrophilic marine bacterium）的 UDG 基因。

产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

应用:
Loop-Mediated Isothermal Amplification

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0372S     -20    
        Antarctic Thermolabile UDG M0372SVIAL -20 1 x 0.1 ml 1,000 units/ml
        Standard Taq Reaction Buffer Pack B9014SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
    • M0372L     -20    
        Antarctic Thermolabile UDG M0372LVIAL -20 1 x 0.5 ml 1,000 units/ml
        Standard Taq Reaction Buffer Pack B9014SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量。检测条件为：50 μl 标准 Taq 反应缓冲液中，37℃ 条件下，30 分钟从含 0.2 μg DNA（104–105 cpm/μg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。

    反应条件

    1X 标准 Taq 反应缓冲液套装
    Incubate at 37°C

    1X 标准 Taq 反应缓冲液套装
    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1.5 mM MgCl2
    (pH 8.3 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    50°C for 5 minutes

    单位活性检测条件

    1X Taq 反应缓冲液、1 单位尿嘧啶 DNA 糖基酶、0.2 μg 3H-尿嘧啶 DNA（104 –105 cpm/μg），在 50 μl 总反应体系中，在 37℃ 条件下反应 30 分钟。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 防止 PCR 交叉污染（1）
    • 去除 DNA 尿嘧啶

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 1 单位酶量是指在 37℃ 条件下，经 NaOH 和热处理后，30 分钟能催化 2.3 nmol 含一个尿嘧啶的 5´ 端 FAM 标记的 26-mer 单链 DNA 转化为 10-mer 单链 DNA 所需的酶量。活性检测在 50 μl 标准 Taq 反应缓冲液中进行：2 pmol 含一个尿嘧啶的 5´ 端 FAM 标记的 26-mer 单链 DNA 和不同酶量，在 37℃ 下反应 30 分钟。
    2. NEB 产品的单位活性比其它供应商的产品高 2 – 5 倍。南极热敏 UDG 在多数 PCR 反应缓冲液中均有活性，但活性受高离子强度（> 100 mM）抑制。

  • 参考文献

    1. Longo, M.C. et al. (1990). Gene. 93, 125-128.

操作说明、说明书 & 用法

  • 应用实例

    • The Luna 4X RT-qPCR Mix and Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit enable high throughput, automated detection workflows

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of UDG in the NEBuffers 1-4?
    2. Will UDG work in T4 DNA ligase buffer?
    3. What is the molecular weight of the thermolabile UDG?
    4. Is UDG a tagged protein?
    5. I see that the Antarctic Thermolabile UDG works at 25-37°C. Do you have another glycosylase that works at higher temperatures?
    6. Does UDG release uracil from ss and dsDNA?
    7. Does UDG cut RNA?
    8. Can UDG be used to remove dU from a short 21mer oligo? Do the dU residues need to be spaced in any special way to avoid problems with cleavage?
    9. Are there any specific recommendations for the use of UDG on single stranded DNA? The materials on the web and data card seem to describe conditions for use with dsDNA.
    10. Will Antarctic Thermolabile UDG cleave uracil-containing DNA in a form of RNA-DNA duplex?
    11. What is the difference between UDG and UNG?
    12. How much Antarctic Thermolabile UDG I should add in a PCR reaction to prevent carry-over contamination?
    13. How do I use Antarctic Thermolabile UDG for carryover prevention in LAMP reactions?