核酸外切酶 V（RecBCD） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

核酸外切酶 V 是一种来自大肠杆菌（E. coli）的 RecBCD 复合蛋白，具有几种不同的活性，包括 ATP 依赖型单链 DNA 核酸内切酶活性、单链和双链 DNA 核酸外切酶活性。反应具有双向（ 3´ 和 5´ 端）持续性，产物为寡聚脱氧核苷酸（1、2、3）。核酸外切酶 V 的所有活性都需要二价阳离子参与。Mg2+ 是核酸外切酶活性所必需的，而 Ca2+ 会抑制核酸外切酶活性，使双链 DNA 解旋（解旋酶活性）而不是水解 DNA（4、5）。

产品来源

大肠杆菌菌株（E. coli），包含表达大肠杆菌核酸外切酶 V 三个亚基的质粒：RecB、RecC 和 RecD。

产品类别:
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0345S     -20    
        Exonuclease V (RecBCD) M0345SVIAL -20 1 x 0.1 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
        Adenosine 5′-Triphosphate (ATP) P0756SVIAL -20 1 x 1 ml 10 mM
    • M0345L     -20    
        Exonuclease V (RecBCD) M0345LVIAL -20 1 x 0.5 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 4 B7004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
        Adenosine 5′-Triphosphate (ATP) P0756SVIAL -20 1 x 1 ml 10 mM

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内能从双链 DNA 底物上催化产生 1 nmol 酸溶性脱氧核糖核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 4
    Supplement with 1 mM ATP
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 4
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.1% Triton® X-100
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    70°C for 30 minutes

    单位活性检测条件

    1X NEBuffer 4、1 mM ATP 与 0.15 mM 经超声处理的双链 [3H]-DNA。

  • 优势和特性

    应用特性

    在保留切刻和超螺旋质粒 DNA 的同时降解线性单链 DNA 和双链 DNA。

  • 相关产品

    相关产品

    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • NEBuffer 4

  • 参考文献

    1. Eichler, D.C. et al. (1977). J.Biol. Chem. 252, 499-503.
    2. Taylor, A.F. et al. (1985). J. Mol. Biol. 185, 431-443.
    3. Amundsen, S.K. et al. (1986). Proc. Natl. Acad. Sci. 83, 5558-5562.
    4. Palas, K.M. et al. (1990). J. Biol. Chem. 265, 3447-3454.
    5. Dillingham, M.S. et al. (2008). Microbiology and Mol. Biol. Review. 72, 642-671.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. A Typical Exonuclease V Reaction (M0345)
    2. Removal of Residual gDNA after Purification of Low Copy Plasmid using Exonuclease V (RecBCD)

  • 使用指南

    • Usage Guidelines for the Monarch Plasmid Miniprep Kit (#T1010) When Working with Low Copy Plasmids

  • 应用实例

    • Using Exonuclease V (RecBCD) to Eliminate Residual Genomic DNA When Purifying Low Copy Plasmids with the Monarch® Plasmid Miniprep Kit

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of Exonucleases and Non-specific Endonucleases
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

  • 研究摘要

    • Choosing the Right Exonuclease (2019)

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the best reaction volume for removal of linear dsDNA?
    2. Does isolated genomic DNA purified by different methods change the cleavage rate of Exonuclease V?
    3. Should I add additional ATP with Exonuclease V if I am scaling up my reaction?
    4. Does Exonuclease V (RecBCD) work in other NEBuffers?
    5. What is the best exonuclease to remove chromosomal DNA during a plasmid prep?
    6. Which enzyme can distinguish between mitochondrial and genomic DNA and only remove gDNA?
    7. Can Exonuclease I be used with a double stranded exonuclease to clean up plasmid preparations?
    8. Does NEB have an equivalent to Lucigen’s Plasmid-Safe?