Klenow 片段（3´→5´ exo-） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Klenow 片段（3´→5´ exo-）是 DNA 聚合酶 I 的 N 末端截短物，它保留了 DNA 聚合酶活性，但失去了 5´→3´ 核酸外切酶活性。该酶经突变（D355A、E357A）去除了其 3´→5´核酸外切酶活性（1）。

重点

  • 从重组酶中分离
  • 用随机引物制备探针
  • 双脱氧法 DNA 测序
  • 随附 10X 反应缓冲液
  • 中等链置换活性

产品来源

大肠杆菌菌株，其携带的质粒上含有E. coli polA（D355A、E357A）基因的片段，片段起始位置在密码子 324 处。

产品类别:
DNA Labeling Products,
DNA Manipulation Products,
Isothermal Amplification & Strand Displacement Products

应用:
Strand Displacement Amplification & Nicking Enzyme,
A-tailing,
DNA Sequencing,

Polymerases for DNA Manipulation,
RT-PCR & cDNA Synthesis,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0212V     -20    
        Klenow Fragment (3’→5′ exo-) M0212VVIAL -20 1 x 0.02 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0212S     -20    
        Klenow Fragment (3’→5′ exo-) M0212SVIAL -20 1 x 0.04 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0212L     -20    
        Klenow Fragment (3’→5′ exo-) M0212LVIAL -20 1 x 0.2 ml 5,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0212M     -20    
        Klenow Fragment (3’→5′ exo-) M0212MVIAL -20 1 x 0.02 ml 50,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    25 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    75°C for 20 minutes

    分子量

    理论上的: 68000 道尔顿

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    No

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    No

    链置换

    +++

    单位活性检测条件

    1X NEBuffer 2，33 µM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 70 µg/ml 变性鲱鱼精子 DNA。

    错配率

    ~ 100×10-6bases

  • 优势和特性

    应用特性

    • 随机引物法标记
    • Sanger 双脱氧法 DNA 测序（2）
    • cDNA 第二条链的合成
    • 突变反应中第二条链的合成（3）。

  • 相关产品

    相关产品

    • dNTP 套装
    • dNTP 混合液
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 注意事项

    1. Klenow 片段（3´→5´ exo-）因去除了 3´→5´ 核酸外切酶的活性不能去除 3´ 突出端，故不适用于生成平末端的反应。
    2. 加入 dNTP 后，Klenow 片段（3´→5´ exo-）在四种 NEBuffer 缓冲液中均有活性。
    3. 在使用双脱氧法（Sanger 等）进行 DNA 测序时，推荐每 5 µl 反应体系中加入 1 单位的 Klenow 片段（3´→5´ exo-）。

  • 参考文献

    1. Derbyshire, V. et al. (1988). Science. 240, 199-201.
    2. Sanger, F. et al. (1977). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 74, 5463-5467.
    3. Gubler, U. (1987). In S.L. Berger & A.R. Rimmel(Ed.), Methods in Enzymology. 152, 330-335. San Diego: Academic Press.
    4. Bebenek, K., Joyce, C.M., Fitzgerald, M.P. and Kunkel, T.A. (1990). J. Biol. Chem.. 265, 13878-13887.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. A-Tailing with Klenow Fragment (3’→5′ exo-)

  • 使用指南

    • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

  • 选择指南

    • A-tailing Selection Chart
    • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
    • DNA Polymerase Selection Chart

  • Web 工具

    • NEBcloner®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be used in other NEBuffers, including rCutSmart?
    2. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be used to blunt DNA?
    3. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be used to fill in 3′ overhangs?
    4. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be used to remove 5′ overhangs?
    5. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be heat inactivated?
    6. Can Klenow Fragment (3’→5′ exo-) be used in labeling reactions and partial fill in reactions?
    7. Are there other methods for making probes?
    8. What is the enzyme of choice for chewing back 3′ overhangs and filling in 5′ overhangs (3′ recessed ends)?
    9. Are NEB DNA Polymerases supplied with dNTPs?