末端转移酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

末端转移酶（TdT）是一种不依赖于模板的 DNA 聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3´ 羟基端。带有突出、凹陷或平末端的双链或单链 DNA 分子均可作为 TdT 的底物。该酶的分子量为 58.3 kDa，无 5´ 或 3´ 核酸外切酶活性。反应中加入 Co2+ 可提高加尾效率。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自小牛胸腺的末端转移酶基因。

产品类别:
DNA Labeling Products,
DNA Manipulation Products

应用:
A-tailing,
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0315S     -20    
        Terminal Transferase M0315SVIAL -20 1 x 0.025 ml 20,000 units/ml
        Terminal Transferase Reaction Buffer Pack B0315SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        CoCl2 B0252SVIAL -20 1 x 1.4 ml 10 X
    • M0315L     -20    
        Terminal Transferase M0315LVIAL -20 1 x 0.125 ml 20,000 units/ml
        Terminal Transferase Reaction Buffer Pack B0315SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        CoCl2 B0252SVIAL -20 1 x 1.4 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 50 反应体系中，37℃ 条件下，以 d(A)18 为引物，1 小时内将 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件

    1X 末端转移酶反应缓冲液套装
    Supplement with 0.25 mM CoCl2
    Incubate at 37°C

    1X 末端转移酶反应缓冲液套装
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM KPO4
    100 mM NaCl
    1.43 mM β-ME
    50% Glycerol
    0.1% Triton® X-100
    pH 7.3 @ 25°C

    热失活

    75°C for 20 minutes

    分子量

    理论上的: 58000 道尔顿

    5′ – 3′ 核酸外切酶

    No

    3′ – 5′ 核酸外切酶

    No

    链置换

    No

    单位活性检测条件

    50 μl 反应体系，1X 末端转移酶反应缓冲液，0.72 μM d(A)18，0.2 mM dTTP 和 1 μCi [3H]- dTTP。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 催化 DNA 的 3´ 末端添加同聚物
    • 利用修饰碱基（如 ddNTP、DIG-dUTP）标记 DNA 3´ 末端
    • TUNEL 检测（细胞凋亡的原位检测）
    • TdT 依赖的 PCR

  • 参考文献

    1. Chang, L.M. and Bollum, F.J. (1986). CRC Crit. Rev. Biochem.. 21, 27-52.
    2. Roychoudhury, R., Jay, E. and Wu, R. (1976). Nucl. Acids Res.. 3, 101-116.
    3. Tu, C.P. and Cohen, S.N. (1980). Gene. 10, 177-183.
    4. Boule, J.B., Rougeon, F. and Papanicolaou, C. (2001). J. Biol. Chem. 276, 31388-31393.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. A Typical DNA Tailing Reaction
    2. A-Tailing (single nucleotide) with Terminal Transferase

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can Terminal Transferase be heat inactivated?
    2. Can Terminal Transferase label the 5′ end of DNA?
    3. Is Terminal Transferase supplied with dNTPs?
    4. Does Terminal Transferase require Co2+ as a divalent cation?
    5. Can just one dNTP be added to the end of DNA with Terminal Transferase?
    6. Does Terminal Transferase have a preference for one type of 3′ DNA end?
    7. What are the kM values for Terminal Transferase?
    8. Will Terminal Transferase add a non-radioactively labeled dNTP?