Luna® Cell Ready 裂解模块 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Luna® Cell Ready 裂解模块 |

细胞培养常替代活体生物用于分析基因表达或治疗反应。传统上，人们通过柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA。Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估 RNA 表达水平，是一种快速、方便且灵敏的替代方案。此模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除，生成的细胞裂解物可直接使用 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使得整个流程可视化。

兼容 Luna Cell Ready 裂解模块的细胞系如下表所示。这些细胞进行 5 个 10 倍梯度稀释（在 50 µl 体系中裂解 10 – 100,000 个细胞），并取 1 µl 裂解物在 20 µl 体系中进行一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外，上述裂解模块经测试也可用于一些昆虫细胞系。

表 1：验证过的细胞系
 

细胞系 特性 种属 50 μl 裂解体系中的细胞数量
A549 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
HEK293 贴壁培养 人肾脏细胞 10 – 100,000
HeLa 贴壁培养 人子宫颈腺癌细胞 10 – 100,000
HepG2 贴壁培养 人肝脏癌细胞 10 – 1,000
NCI-H460 贴壁培养 人肺癌细胞 10 – 100,000
SK-N-SH 贴壁培养 人脑成神经细胞瘤细胞 10 – 10,000
U2Os 贴壁培养 人骨骼骨肉瘤细胞 10 – 100,000
Jurkat 悬浮培养 人 T 淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
K-562 悬浮培养 人成淋巴细胞白血病细胞 10 – 100,000
图 1：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

Luna® Cell Ready 裂解模块 |

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，实验流程简洁，仅需 15 分钟即可有效完成细胞裂解、RNA 释放并同时去除基因组 DNA。可将多达 2 µl 裂解物（相当于 0.2 – 4,000 个细胞的 RNA）用于下游 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

 

产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3032S     -20    
        Luna Cell Ready Lysis Buffer B8036AVIAL -20 2 x 1.4 ml 2 X
        Luna Cell Ready RNA Protection Reagent M0469AVIAL -20 1 x 0.25 ml 25 X
        Luna Cell Ready Protease M0473AVIAL -20 1 x 0.2 ml 25 X
        Luna Cell Ready Stop Solution B8037AVIAL -20 1 x 0.6 ml 10 X
       

      DNase I (RNase-free)

      		 M0474AVIAL -20 1 x 0.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 磷酸盐缓冲液（PBS）
    • 细胞
    • Eppendorf 管
    • PCR 联管
    • PCR 板
    • 移液器和移液枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Luna® Cell Ready Lysis Module (NEB #E3032)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3032

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents
    • Facilitating Detection of SARS-CoV-2 Directly from Patient Samples: Precursor Studies with RT-qPCR and Colorimetric RT-LAMP Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What cell lines are compatible with the Luna Cell Ready Lysis Module (NEB #E3032)?
    2. How many cells should I use for reliable detection?
    3. How many cells should I seed into cell culture plates to achieve optimal detection?
    4. Can cryopreserved cell lines or pelleted cells stored at -80°C be used with this kit? 
    5. How can lysis efficiency be determined?
    6. Why is it important to evaluate RNA damage or inhibition during cell lysis and one-step RT-qPCR detection?
    7. What is the “Luna Cell Ready RNA Protection Reagent” and when should it be used?
    8. Should I include a No-RT control reaction?
    9. Will the blue tracking dye interfere with detection?
    10. Is cell washing prior to lysis necessary?
    11. Which lysis format should I use?
    12. What protocol should be used for cell lysis? Can cells be lysed at room temperature or using a short protocol?
    13. Can I use the cell lysates generated from the Luna Cell Ready Lysis Module for two-step RT-qPCR? 
    14. When using cell lysates generated from Luna Cell Ready Lysis Module, can RT-qPCR experiments be set up at room temperature?
    15. How much cell lysate should I use as input? (NEB #3030)
    16. Why does the Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit contain more RT-qPCR reactions than lysis reactions?
    17. If either the Luna Cell Ready Lysis Module or Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit runs out, can I order them separately?
    18. How can I obtain more technical help related to Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit?