Luna® 通用 qPCR 预混液 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

染料法定量 PCR（qPCR）通过双链 DNA（dsDNA）结合染料（常用的染料为 SYBR® Green I）的荧光，来实时测量每个 PCR 循环过程中的 DNA 扩增。通过荧光信号显著超过背景荧光所经历的循环数，可以确定 Cq 值。Cq 值可用于评估两个或多个样品之间的靶基因相对丰度，或者参考通过已知浓度样品绘制的标准曲线，对未知样品绝对定量。

Luna 通用 qPCR 预混液是经优化的 2X 反应预混液，可以用于对靶标 DNA 序列进行实时 qPCR 检测和定量，适用于使用大多数实时荧光定量 qPCR 仪器的 SYBR®/FAM 通道。该预混液包含热启动 Taq DNA 聚合酶，还添加了独特的惰性参比染料，该染料可与多种 qPCR 仪器兼容（包括需要高 ROX 或低 ROX 参比信号的仪器）。独具特色的是：预混液还包含可防止交叉污染的 dUTP，以及有助于观察反应体系建立的非荧光可见示踪染料。该染料的光谱与 qPCR 荧光染料不重叠，因此不会影响到实时检测数值。

该预混液浓度为 2X，包含 DNA 扩增和定量所需的所有 PCR 组分（引物和 DNA 模板除外）。使用 Luna qPCR 配合已有的商品化的 qPCR 测定引物，可对基因组 DNA 或感兴趣的 cDNA 进行定量检测。

图 1：Luna 通用 qPCR 预混液具有更高的灵敏度、更出众的可重复性以及更优异的 RT-qPCR 表现
Luna® 通用 qPCR 预混液 |
使用 Luna 通用 qPCR 预混液检测人 GAPDH 基因，起始量模板为 6 个 10 倍梯度稀释的 Jurkat cDNA（20 ng – 0.2 pg），每个浓度的样品做 8 次重复。cDNA 使用 NEB 的 Protoscript® II cDNA 第一链合成试剂盒（NEB #E6560）从 Jurkat 总 RNA 中反转录获得。
图 2：Luna 通用 qPCR 预混液试剂盒可对各种来源的 DNA 进行灵敏准确的检测和定量分析
Luna® 通用 qPCR 预混液 |
Luna 通用 qPCR 预混液适用于各种来源的基因组 DNA 模板。使用 ABI 7500 荧光定量仪器，以 50 ng – 0.5 pg 基因组 DNA 作为模板对靶标基因进行定量检测。基因组 DNA 通过柱提法纯化获得。在这些示例中，无论是小鼠肾脏基因组 DNA 的 ACTB（编码 β-肌动蛋白）、烟草的 psbB（Photosystem II CP47 反应中心蛋白 PsbB）还是酵母的 RDN18（18S 核糖体 RNA），Luna 产品都展现了稳健的扩增性能。
图 3：与市售的染料法 qPCR 试剂相比，Luna 产品展现出更好的稳定性和特异性
Luna® 通用 qPCR 预混液 |
使用 NEB 和其它品牌的 qPCR 试剂对 16 – 18 个不同丰度、长度和 GC 含量的目的基因进行 qPCR 测试，以 Jurkat 基因组 DNA 或 Jurkat cDNA 为模板（使用 Bio-Rad 仪器检测 10 个基因组模板和 8 cDNA 模板，使用 ABI 的仪器检测 9 个基因组模板和 7 个 cDNA 模板）。每份检测结果由两个实验者根据厂商说明书获得。从以下方面评估了测试结果：扩增效率、痕量样本检测能力及无模板扩增值（ΔCq = 无模板对照的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。此外，一致性、可重复性以及曲线的整体质量评估也作为实验的参考（质量分数）。柱状图展示了符合可接受的性能标准的百分比（由点图上的绿色框表示，质量分数 > 3）。NEB 和其它品牌测试结果如下：Bio-Rad，SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix；Roche，FastStart™ SYBR Green Master；QIAGEN，QuantiTect® SYBR Green PCR Kit；ABI，PowerUP™ SYBR Green Master Mix；Promega®，GoTaq® qPCR Master Mix。Luna 通用 qPCR 预混液性能优于其它测试试剂。

详细了解 qPCR/RT-qPCR 综合测试和“dots in boxes”数据可视化分析方法

图 4：Luna 通用 qPCR 预混液包含惰性蓝色示踪染料，可避免加样错误。
Luna® 通用 qPCR 预混液 |

 

产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M3003V     -20    
        Luna® Universal qPCR Master Mix M3003VVIAL -20 1 x 1 ml 2 X
    • M3003S     -20    
        Luna® Universal qPCR Master Mix M3003SVIAL -20 2 x 1 ml 2 X
    • M3003L     -20    
        Luna® Universal qPCR Master Mix M3003SVIAL -20 5 x 1 ml 2 X
    • M3003X     -20    
        Luna® Universal qPCR Master Mix M3003SVIAL -20 10 x 1 ml 2 X
    • M3003E     -20    
        Luna® Universal qPCR Master Mix M3003EVIAL -20 1 x 25 ml 2 X

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操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Luna® Universal qPCR Master Mix Protocol (M3003)
    2. Protocol for Two-step RT-qPCR using the LunaScript® RT SuperMix Kit (NEB #E3010) and the Luna® Universal qPCR Master Mix (NEB #M3003) or Luna Universal Probe qPCR Master Mix (NEB #M3004) 

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualM3003

  • 使用指南

    • Optimization Tips for Luna® qPCR

  • 应用实例

    • High-throughput qPCR and RT-qPCR Workflows Enabled by Beckman Coulter Echo Acoustic Liquid Handling and NEB Luna Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How do I use qPCR to determine the concentration of my material?
    2. Can I set up my Luna® qPCR at room temperature?
    3. What is the difference between probe- and dye-based versions of the Luna® qPCR Mixes?
    4. Should I use probe- or dye-based detection for my qPCR assays?
    5. How should I design primers for Luna® qPCR?
    6. How long should my amplicon be for qPCR?
    7. Why is the Luna® qPCR Mix blue? Will this dye interfere with detection?
    8. Can I run the Luna® qPCR Mix on my qPCR instrument?
    9. Can I use fast instrument settings with the Luna® qPCR Mix?
    10. Do I need to add ROX?
    11. How many dilutions should I use to make a standard curve?
    12. Why does NEB recommend 40-45 cycles?
    13. Does the Luna® qPCR Mix contain dUTP? Can I use carryover contamination prevention methods?
    14. Why do I have multiple peaks in my melt curve?
    15. How can I distinguish non-template amplification (NTC) from real products?
    16. Why do I see amplification curves in my NTC samples?
    17. What samples can be used in qPCR with the Luna® Mix?
    18. Can I use cDNA? Does it matter how I make it?
    19. How much template material can I use in Luna® qPCR?
    20. How much primer should I use for the Luna® Universal qPCR Master Mix?
    21. Can I use shorter cycling times?
    22. What is the fluorescent, double-stranded DNA binding dye in the Luna® qPCR master mix?

  • 问题解决指南

    • Luna® qPCR Troubleshooting Guide