Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

许多有校对功能的聚合酶来自古细菌家族 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的尿嘧啶碱基时停止复制(Wardle, J. et al. (2008) Nucleic Acids Res. 36 (3), 705-711)。Q5U 在尿嘧啶结合域含有突变，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板。该特征可用于扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损 DNA，用于防止 PCR 体系中携带污染（与 dUTP 和 UDG 一起使用），以及用于 USER 克隆方法。

Q5U 是一种热启动聚合酶，含有在室温下抑制聚合酶活性的独特适配体，可在经典 PCR 条件下达到最佳扩增。

图 1：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

古细菌家族 B 型聚合酶可以掺入/耐受多种修饰的核苷酸，但在遇到尿嘧啶和次黄嘌呤时会停止扩增。Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶是一种经过改造的 Q5 超保真 DNA 聚合酶，可有效地整合 dUTP 并扩增含尿嘧啶的模板。由 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶的常见应用如上图所示。

图 2：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶实现重亚硫酸氢盐转化 DNA 的优异扩增

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增重亚硫酸氢盐转化的人基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。每 25 μl 反应物含有 12 ng 重亚硫酸氢盐转化的 DNA（Qiagen）。所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 3：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增石蜡包埋正常肺样品 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

石蜡包埋正常肺样品 DNA（Biochain）。扩增片段长度标注在电泳胶上方，每个 25 μl 反应物含有 18 ng FFPE DNA（Biochain），循环条件与该样品类型的推荐一致，通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 4：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶能够高效扩增酶促脱氨的 DNA 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶（Q5U）、Phusion U 热启动 DNA 聚合酶（P）和 KAPA Hifi HotStart Uracil + ReadyMix PCR 试剂盒（K）扩增酶促脱氨（APOBEC）的基因组 DNA 靶标。扩增子名称和片段长度标注在电泳胶上方。 每个 50μl 反应物含有 12 ng 酶促脱氨基的 DNA。 所有反应均根据制造商的推荐使用 35 个循环进行，并通过微流体芯片 LabChip 分析展现。

图 5: USER® 克隆流程 

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

在 USER 克隆中，通过 PCR 扩增出 DNA 靶分子和克隆载体，两个片段的同源序列设计为 8-12 个碱基。PCR 引物以 5’A 起始，并在同源区 3’端含有一个脱氧尿嘧啶（dU），可以设计为多片段组装，核苷酸替换，插入和/或缺失。我们建议使用 GeneDesign 软件为 USER 连接点设计引物。建议每种引物终浓度为 0.5 μM 即可得到最佳结果。

图 6：Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶与 Taq 热启动 DNA 聚合酶相比，可更高效准确的用于USER克隆

Q5U® 热启动超保真 DNA 聚合酶 |

使用 Q5U 热启动超保真 DNA 聚合酶和热启动 Taq DNA 聚合酶做 USER 克隆，将 3 kb lacZ 基因连接到 pET21a 载体骨架中。菌落总数（A）和蓝色菌落的百分比（B）证明：有 Q5U 的反应展现了更高的组装效率和更高的准确度。使用 Sanger 测序进一步验证组装准确性，结果显示：普通 Taq 酶组装的 4 个蓝色克隆中有许多点突变，但使用 Q5U 的 4 个蓝色克隆中没有突变（C）。“X”表示用普通 Taq 酶产生的克隆中发现的点突变数量，与以前的研究结果同样证明了 lacZ 的高突变耐受性。(Barnes, W. M. (1992) Gene, 112, 29-35.) 

产品类别:
Q5® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
Applications of USER® and Thermolabile USER II Enzymes,
Bisulfite Sequencing,
DNA Methylation Analysis,

USER® Cloning,
PCR,
Epigenetics,
High-Fidelity PCR,
Multiplex PCR,

DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0515S     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515SVIAL -20 1 x 0.05 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 1 x 1.5 ml 5 X
    • M0515L     -20    
        Q5U® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase M0515LVIAL -20 1 x 0.25 ml 2,000 units/ml
        Q5U®  Reaction Buffer B9037SVIAL -20 4 x 1.5 ml 5 X

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. PCR Using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase (NEB #M0515)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How do I enable carryover contamination prevention with Q5U?
    2. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify bisulfite-treated DNA? 
    3. What are the general recommendations for designing primers for bisulfite-treated/deaminated DNA?
    4. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase for USER® cloning methods?
    5. Can I use Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase to amplify FFPE DNA? 
    6. What ends will my PCR products have?
    7. What are Hot Start and WarmStart® polymerases and when would I use them?
    8. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    9. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    10. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    11. What are the differences between the numerous Q5® Polymerase products available?
    12. When and how should I use the Q5® High GC Enhancer?
    13. Can I use Q5 Reaction Buffer with this enzyme?
    14. How can I optimize my product yield using Q5U Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase?