LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

LunaScript 反转录 SuperMix 为经过优化的预混液，可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序，以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶，可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂，以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液含有随机六聚体和 poly-dT 引物，可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外，混合液还包含蓝色染料，可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。总 RNA 起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA，均能得到稳定、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒（无引物）（NEB #E3025）是经过优化的预混液产品，包含除引物外的第一链 cDNA 合成所需的所有组分，适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该混合液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容，让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击此处。

与 LunaScript 试剂盒版本（NEB #E3010）相比，此 LunaScript 产品不含无核酶水和 No-RT 对照混合液。更多信息如下：

图 1：LunaScript 产品比较

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |

图 2：一步法和两步法 RT-qPCR 实验产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |

图 3：LunaScript® 反转录 SuperMix 混合液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟）将 RNA 转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）和 1 μl cDNA 作为模板，对 cDNA 进行 qPCR 定量；每种起始量浓度做三个重复。

 

A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 pg）反转录为 cDNA，然后通过 qPCR 对 β-actin 靶标进行定量。

 

B. ERCC（External RNA Controls Consortium）对照 mix 1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的 ERCC00130（~10 ng – 10 fg），反转录为 cDNA 后通过 qPCR 进行定量。

图 4：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
设计八对引物覆盖整个 15.2 kb HERC1 转录本。在 20 μl 反应体系中，使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 混合液，在标准反应条件下（25℃/2 分钟，55℃/10 分钟，95℃/1 分钟），将 Jurkat 总 RNA（1 μg – 1 ng）反转录为 cDNA。然后将 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB #M3003）和 1 μl cDNA 产物作为模板，对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估；每个靶标的起始量浓度均做重复。
图 5：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
根据各厂商产品说明书使用市售的 cDNA 合成混合液，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液（NEB＃M3004）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。

 

详细了解此“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法。

图 6：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液的第一链 cDNA 合成时间最短，仅需 13 分钟。

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
不同厂家的 cDNA 合成方案比较。LunaScript 反转录 SuperMix 混合液所需的反应时间最短，并且可以耐受高温，降低了 RNA 复杂二级结构的影响。
图 7：LunaScript 反转录 SuperMix 混合液在室温条件下稳定性极佳

LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 |
LunaScript 反转录 SuperMix 混合液与其它市售产品在 25℃ 条件下放置 15 天，之后根据各厂商产品说明书，将 1 μg – 100 pg 人（Jurkat）总 RNA 反转录成为 cDNA。然后通过 8 个靶标（丰度、长度和 GC 含量不同）的 qPCR，对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液（NEB＃M3003）进行 qPCR 检测。从以下方面评估了反应结果：扩增效率和 ΔCq，其中 ΔCq 衡量低起始量检测和无模板对照（NTC）扩增（ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq）。绿色框表示目标扩增表现（效率 = 90 – 110%，ΔCq ≥ 3）。

 

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产品类别:
Luna® qPCR & RT-qPCR Products

应用:
qPCR & RT-qPCR,
Reverse Transcription (cDNA Synthesis)

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E3010S     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        No-RT Control Mix M3011SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
    • E3010L     -20    
        LunaScript® RT SuperMix M3010LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        No-RT Control Mix M3011LVIAL -20 1 x 0.4 ml 5 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 4 x 1.5 ml Not Applicable

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操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for LunaScript®  RT SuperMix Kit (E3010)
    2. Protocol for Two-step RT-qPCR using the LunaScript® RT SuperMix Kit (NEB #E3010) and the Luna® Universal qPCR Master Mix (NEB #M3003) or Luna Universal Probe qPCR Master Mix (NEB #M3004) 

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE3010

  • 应用实例

    • Facilitating Detection of SARS-CoV-2 Directly from Patient Samples: Precursor Studies with RT-qPCR and Colorimetric RT-LAMP Reagents

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can I use RNA samples purified from different storage conditions such as RNALater in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    2. Can I add gene-specific primers in my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    3. Can I set up my cDNA synthesis reaction at room temperature when using the LunaScript® RT SuperMix?
    4. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT SuperMix?
    5. Can I use LunaScript cDNA products directly in qPCR? How much can I use for detection in a qPCR reaction?
    6. How much RNA template should I use in my LunaScript® cDNA synthesis reactions?
    7. How should I store LunaScript® cDNA products?
    8. How should I choose between a one-step RT-qPCR or two-step RT-qPCR approach?
    9. Should I include a No-Reverse Transcriptase (RT) control reaction when setting up my cDNA synthesis reaction?
    10. What qPCR reagents do you recommend for detection of cDNA products?
    11. What temperature should I use for my LunaScript® cDNA synthesis reaction?
    12. Why do I have low cDNA yields?
    13. Will the blue dye in the LunaScript® RT SuperMix interfere with detection?
    14. How do I choose between the first strand cDNA synthesis kits from NEB?
    15. When using LunaScript cDNA products in downstream PCR (i.e., two-step RT-PCR), what volumes and PCR products can be used? 

    16. Can I use LunaScript RT SuperMix in RNA-seq workflows?

       

    17. How do I choose between LunaScript RT SuperMix Kit and ProtoScript first strand cDNA synthesis kits?
    18. Can I use a shorter incubation time for my cDNA synthesis reaction when using the LunaScript® RT Master Mix (Primer-free)? Does longer incubation increase the yield of cDNA?
    19. How do I choose between Induro Reverse Transcriptase and the different LunaScript and ProtoScript products?
    20. How do I know whether my template RNA is of good quality?