PCR 预混液（提供 GC 缓冲液） | |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

超保真 DNA 聚合酶对于扩增后需要 DNA 序列正确的应用非常重要。Phusion 超保真 DNA 聚合酶兼备高保真度和稳健扩增的性能，适用于所有 PCR 应用。其拥有独特的结构，将一种类似火球菌属（Pyrococcus）来源的新型酶，与增强持续合成能力的结构域融合表达，从而提高保真度和扩增速度。Phusion DNA 聚合酶是克隆的理想选择，可用于长片段或难扩增的扩增子。Phusion 是目前具有最高扩增准确性的热稳定型聚合酶之一，错配率是 Taq DNA 聚合酶 1/50，是火球菌（Pyrococcus furiosus）DNA 聚合酶（1）的 1/6。Phusion DNA 聚合酶具有 5´→3´ 聚合酶活性和 3´→5´ 核酸外切酶活性，可生成平末端产物。

Phusion 超保真 PCR 预混液（提供 GC 缓冲液）具备稳健扩增的性能，适用于所有 PCR 应用。这款 2X 预混液由 Phusion DNA 聚合酶、dNTP 和已优化且含 MgCl2的缓冲液组成。只需添加模板、引物和水，即可建立反应。

PCR 预混液（提供 GC 缓冲液） | |
保真度测定基于 lacI 法（改造自 Frey 和 Suppman 在 1995 年提出的方法）。
PCR 预混液（提供 GC 缓冲液） | |
以 50 ng Jurkat 基因组 DNA 为模板，用不同的聚合酶扩增长度为 3.8 kb 的片段。根据产品说明书中的推荐条件建立反应体系。延伸时间已在图中标出（以分钟为单位）。Ladder L 是 1 kb DNA Ladder。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Phusion DNA 聚合酶基因。

产品类别:
Phusion® High-Fidelity DNA Polymerases Products,
Master Mixes Products

应用:
Long Range PCR,
Fast PCR,
High-Fidelity PCR,

Multiplex PCR,
Specialty PCR,
Routine PCR,

PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0532S     -20    
        Phusion® High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer M0532SVIAL -20 2 x 1.25 ml 2 X
        DMSO B0515AVIAL -20 1 x 0.5 ml 100 %
    • M0532L     -20    
        Phusion® High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer M0532SVIAL -20 10 x 1.25 ml 2 X
        DMSO B0515AVIAL -20 2 x 0.5 ml 100 %

  • 特性和用法

    热失活

    否

    单位活性检测条件

    25 mM TAPS-HCl（25℃ 时 pH 9.3）、50 mM KCl、2 mM MgCl2、1 mM β-巯基乙醇、200 μM dNTP（含 [3H]-dTTP）和 15 nM 已结合引物的 M13 DNA。

    单位定义：
    1 单位是指在 74℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

    反应条件：
    1X Phusion 超保真 PCR 预混液（提供 GC 缓冲液）、DNA 模板、0.5 µM 引物和 3% DMSO（可选），总反应体积为 50 µl。

  • 优势和特性

    Features

    • 稳健的反应体系 – 最少的优化工作伴随最大的成功可能性
    • 超高保真度 – 是 Taq 酶的 50 倍
    • 快速 – 显著缩短延伸时间（是 Pfu 酶的 10 倍）
    • 高产量 – 使用最少量的酶提高产物产量
    • 通用性 – 可用于常规 PCR 以及长片段或难扩增的模板。

    应用特性

    • PCR
    • 克隆
    • 长片段或难扩增片段的扩增
    • 高通量 PCR

  • 相关产品

    相关产品

    • Phusion® 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）
    • m0530-phusion-high-fidelity-dna-polymerase
    • Phusion® HF 反应缓冲液套装
    • Phusion® GC 反应缓冲液套装
    • MgCl2 溶液
    • dNTP 混合液
    • dNTP 套装
    • Phusion® High-Fidelity PCR Kit

  • 注意事项

    1. Products specifications for individual components in the Phusion High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer are available separately.

  • 参考文献

    1. Frey, B. and Suppman, B. (1995). BioChemica. 2, 34-35.
    2. Chester, N. and Marshak, D.R. (1993). Analytical Biochemistry. 209, 284-290.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Phusion® High-Fidelity PCR Master Mix with GC Buffer

  • 使用指南

    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
    • Guidelines for PCR Optimization with Thermophilic DNA Polymerases

工具 & 资源

  • 选择指南

    • DNA Polymerase Selection Chart
    • Thermophilic DNA Polymerases

  • Web 工具

    • Tm Calculator

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What are the differences between the various available Phusion® products?
    2. My results are not as expected. Where can I find troubleshooting help?
    3. What ends will my PCR products have?
    4. What does exonuclease activity mean for a DNA polymerase?
    5. Does Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase exhibit a strand displacement activity?
    6. What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)?
    7. How should I determine the appropriate annealing temperature for my reaction?
    8. What should the final primer concentration be in my PCR?

  • 问题解决指南

    • PCR Troubleshooting Guide

  • 实验技巧

    Phusion 对退火温度的要求与大多数 PCR 酶不同。请访问 www.neb.cn/tmcalculator，帮助您确定最佳的 Phusion 退火温度。