WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）为 LAMP/RT-LAMP 提供了便捷的一步法解决方案，适用于 DNA 或 RNA 样品。LAMP 和 RT-LAMP 是一种常用等温扩增技术，通过使用 LAMP 特异性引物（用户自备）和链置换 DNA 聚合酶进行靶标核酸的快速检测。该预混液是在优化后 LAMP 缓冲液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶均经过基因工程改造，提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反应中的性能。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）具备完全缓冲力，可兼容不同样品类型，适用于多种检测方法，包括：浊度检测、实时荧光检测（使用 LAMP 荧光染料时）和终点可视化检测，例如：基于金属离子指示剂的变色检测（羟基萘酚蓝）

由于先前扩增的产物会无意中成为后续反应的底物造成污染，因此预混液中的 dUTP 和热敏 UDG 可有效降低交叉污染风险。热敏 UDG 在温度高于 50℃ 时可完全失活，因此对反应没有影响。

 

图 1：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）适用于多种检测方法

WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） |

使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）（NEB #M1708）对靶标 RNA 或 DNA 扩增，可通过多种实时（A）和终点（B）检测方法进行结果判定。这些检测方式包括荧光法、不基于 pH 的变色法（例如：羟基萘酚蓝）、浊度法或琼脂糖凝胶电泳。对于实时荧光检测，可使用包含 50X LAMP 荧光染料的试剂盒（NEB #E1708），在常规实时 PCR 仪器的 SYBR®/FAM 通道中进行监测。

图 2：LAMP/RT-LAMP 预混液和适用样品类型

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NEB 基于 pH 变化的 WarmStart 变色 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含/不含 UDG）（NEB #M1804）（NEB# M1800）缓冲力低，因此可使用 pH 敏感染料进行可视化扩增检测。基于 pH 值改变而产生的颜色变化（如粉红变黄色）所需缓冲力要低，高缓冲力样品或酸性样品可能会影响颜色变化，因此，这种方法限制了检测样品的种类。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG，NEB #M1708、NEB #E1708；不含 UDG，NEB #E1700）具备完全缓冲力，可检测这些样品类型，适用于多种检测方法，包括荧光或其它变色染料（例如：羟基萘酚蓝）。

图 3：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）可对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测

WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） |

使用 NEB #M1700 进行 RT-LAMP（RNA 靶标）或 LAMP（DNA 靶标）实验：WarmStart LAMP 2X 预混液是 NEB #E1700 试剂盒（不含 dUTP/UDG）中的预混液和 NEB #M1708：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）。反应加入 1X LAMP 引物和 1X LAMP 荧光染料后，分别加入三个数量级的总 Jurkat RNA 或 Jurkat DNA（10 ng – 0.1 ng），每个样品做 4 个重复，反应体系为 25 µl。同时设置了无模板的对照反应（NTC）。置于 96 孔板中 65℃ 温育 40 分钟，使用实时热循环仪（Bio-Rad® CFX96）中的 SYBR/FAM 通道进行 15 秒一次的荧光检测。每个点代表单个反应的荧光信号超过仪器阈值的时间。除了个别说明外，每个样品都检测到所有四个重复（注：如果各重复的检测时间相似，则检测点重叠）。总体而言，各样品检测结果显示：NEB #M1700 和 NEB #M1708 性能一致。无模板对照均无扩增。

图 4：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）与自动化反应装置兼容

WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） |

通过手动或 TEMPEST® 自动化液体处理工作站（96 孔板，25 µl 反应体系）建立针对合成 SARS-CoV-2 RNA 样品的 LAMP 检测体系。检测样品为：阳性样品（人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA）或无模板对照（NTC），如图所示。经 65℃ 温育 40 分钟，使用 1X LAMP 荧光染料在实时荧光仪器（Bio-Rad CFX96）中的 SYBR/FAM 通道检测。结果显示：两种体系的检测时间和最低检出限（LOD）结果一致。

图 5：WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）兼容不基于 pH 的变色检测法（例如：羟基萘酚蓝）

WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG） |

使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）和针对 N 和 E 基因的混合引物对合成 SARS-CoV-2 RNA 进行扩增，使用 0.12 mM 羟基萘酚蓝作为变色金属指示剂。测定样品为：阳性样品（人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA）、阴性样本（人总 RNA）或无模板对照（NTC），如图所示。反应体系（25 µl）经 65℃ 温育 45 分钟后，进行肉眼检测。

A.所有阳性样品均显示阳性结果，包括在所有仅含 50 拷贝的低起始量样品（n = 20），颜色明显从紫色变为蓝色。

B.所有阴性样品的大量重复均未出现颜色变化（n = 32）。

产品类别:
Isothermal Amplification & Strand Displacement Products,
Master Mixes Products

应用:
Loop-Mediated Isothermal Amplification

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M1708S     -20    
        WarmStart® Multi-Purpose LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (with UDG) M1708SVIAL -20 1 x 1.25 ml 2 X
    • M1708L     -20    
        WarmStart® Multi-Purpose LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (with UDG) M1708SVIAL -20 5 x 1.25 ml 2 X

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    LAMP 引物（我们推荐使用 NEB LAMP Primer Design Tool）
    靶标核酸样品
    分子生物学级 H2O
    加热块、水浴、实时浊度计或热循环仪（可按需进行实时荧光测量）和适合仪器的反应容器
     

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    • m0380-warmstart-rtx-reverse-transcriptase

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. WarmStart® Multi-Purpose LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (with UDG) Protocol (NEB #M1708)

  • 应用实例

    • Optimizing rapid isothermal workflow for SARS-CoV-2 with WarmStart® LAMP with UDG

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the optimal LAMP/RT-LAMP amplification temperature?
    2. What is the Mg++ concentration in the WarmStart LAMP/RT-LAMP Master Mix?
    3. What types of input samples/materials are compatible with the LAMP/RT-LAMP mixes?
    4. How fast should I expect a result?
    5. Can I set up my LAMP/RT-LAMP reactions at room temperature?
    6. The WarmStart LAMP Master Mix has some precipitation in the tube after thawing, is this normal?
    7. How do I design LAMP Primers?
    8. Does the WarmStart LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (with UDG) enable carryover prevention/contamination reduction?
    9. Amplification occurred in my NTC sample(s) following isothermal incubation. What happened?
    10. What detection methods can be used for LAMP/RT-LAMP experiments?
    11. What are the advantages of using standard LAMP (NEB #E1700, M1708, E1708) over pH-based colorimetric LAMP (NEB #M1800, M1804)?
    12. Is a separate incubation step required for RT-LAMP?
    13. What type of purification is recommended for LAMP primers?

质控、安全 & 法规

  • 质控分析

    每一新批次的 NEB 产品都要经过质控，以满足指定的质量标准，对特定产品的质量标准和每一批次的检测数据可以通过产品说明表格、COA、产品信息卡或者产品手册进行查阅或下载。关于 NEB 产品质控的详细信息，可从此处查阅。

  • 产品说明与变更通知

    产品说明表包含产品的储存温度、有效期和规格，这些文件的命名规则如下：[货号]_[规格]_[版本]

    • E1708S_L_v1
    • M1708S_L_v1
    • M1708S_L_v2

  • CoA 文件包含单个批次产品的储存温度、有效期和质控，这些文件的命名规则如下： [货号]_[规格]_[版本]_[Lot#]

    • M1708L_v1_10114262
    • M1708S_v1_10114146
    • M1708L_v1_10127504
    • M1708S_v1_10130665
    • M1708L_v2_10131921
    • M1708S_v2_10131920
    • M1708L_v2_10133281
    • M1708S_v2_10135701
    • M1708L_v2_10137993
    • M1708S_v2_10140429
    • M1708L_v2_10140736
    • M1708L_v2_10140974
    • M1708S_v2_10140940
    • M1708L_v2_10146128
    • M1708S_v2_10146997
    • M1708L_v2_10147829
    • M1708L_v2_10148400
    • M1708S_v2_10151075
    • M1708L_v2_10154380
    • M1708S_v2_10152956
    • M1708S_v2_10155819
    • M1708L_v2_10154961
    • M1708S_v2_10162788
    • M1708L_v2_10162371
    • M1708S_v2_10166604
    • M1708L_v2_10165616
    • M1708L_v2_10173079
    • M1708L_v2_10175343
    • M1708S_v2_10180126
    • M1708S_v2_10184596
    • M1708L_v2_10180987
    • M1708S_v2_10197179
    • M1708S_v2_10208061
    • M1708L_v2_10222575
    • M1708S_v2_10222576
    • M1708L_v2_10233912

  • SDS

    以下 SDS 文件可以帮助您安全地使用该产品

    • WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）

  • 法律 & 免责声明

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    许可证

    购买本产品即向买方授予一项不可转让的有限权利，即买方仅可出于研究目的将本产品用于环介导扩增（“LAMP”）和反转录环介导扩增（“RT-LAMP”）。LAMP 是 Eiken Chemical Co., Ltd 的专利技术，除研究以外的其它用途均需另外征得 Eiken Chemical Co., Ltd 的许可。

    SomaLogic 公司已向 NEB 公司授权可将核酸适配体与嗜热 DNA 聚合酶和反转录酶联合使用的独家许可。NEB 公司授予买方/用户非独家许可，即 WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液（含 UDG）仅供研究使用（RUO）。要将本产品用于商业用途，需另外征得 NEB 公司的授权。如需了解更多信息或咨询商业用途，请联系 [email protected]。