产品信息

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  NEB #	名称	组分货号	储存温度	数量	浓度
  M0203S     -20       T4 DNA Polymerase M0203SVIAL -20 1 x 0.05 ml 3,000 units/ml   NEBuffer™ r2.1 B6002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
  M0203L     -20       T4 DNA Polymerase M0203LVIAL -20 1 x 0.25 ml 3,000 units/ml   NEBuffer™ r2.1 B6002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

• 特性和用法

  单位定义

  1 单位是指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量（5）。

  反应条件

  1X NEBuffer™ r2.1

  1X NEBuffer™ r2.1
  50 mM NaCl
  10 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25°C)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ 1: 60%
  NEBuffer™ 2: 100%
  NEBuffer™ 3: 100%
  NEBuffer™ 4: 100%

  贮存溶液

  100 mM KPO₄
  1 mM DTT
  50% Glycerol
  pH 6.5 @ 25°C

  热失活

  75°C for 20 minutes

  分子量

  理论上的: 104000 道尔顿

  5′ – 3′ 核酸外切酶

  No

  3′ – 5′ 核酸外切酶

  Yes

  链置换

  No

  单位活性检测条件

  1X NEBuffer 2.1、33 µM dNTP（含 [³H]-dTTP）、70 µg/ml 变性鲱鱼精子 DNA。

  错配率

  ~ 1×10^-6bases

• 优势和特性

  应用特性

  • 去除 3´ 突出末端以形成平末端（1,2）。
  • 补平 5´ 突出末端以形成平末端（1,2）。
  • 单链缺失亚克隆（3）。
  • 定点突变中的第二链合成（4）。
  • 使用置换合成进行探针标记（1,2）。

• 相关产品

  相关产品

  • dNTP 套装
  • dNTP 混合液
  • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
  • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
  • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  单独销售的组分

  • NEBuffer™ r2.1

• 注意事项

  1. 仅用于补平反应：T4 DNA 聚合酶兼容 NEBuffer 1.1、2.1、3.1 和 CutSmart^® 缓冲液，以及 NEBuffer 1 – 4 和 T4 DNA 连接酶反应缓冲液。
  2. 用于需要去除突出末端的平齐化反应：T4 DNA 聚合酶兼容 NEBuffer 1.1、2.1 和 CutSmart 缓冲液，以及 NEBuffer 1、2、4 和 T4 DNA 连接酶反应缓冲液。在需要去除突出末端时，不推荐使用 NEBuffer 3.1 和 3。
  3. NEBuffer 2.1 活性最佳。
  4. 补充 dNTP。*
  5. 使用不含 BSA 的缓冲液时，建议补充 BSA。
  6. 在特定操作步骤建议的温度下温育。

     * 参阅特定操作步骤以确定推荐的 dNTP 浓度。

     参阅
  7. Elevated temperatures, excessive amounts of enzyme, failure to supplement with dNTPs or long reaction times may result in recessed ends due to the 3´→ 5´ exonuclease activity of the enzyme.

• 参考文献

  1. Tabor, S. and Struhl, K. (1989). DNA-Dependent DNA Polymerases. In F. M. Ausebel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, J. A. Smith and K. Struhl(Ed.), Current Protocols in Molecular Biology. 3.5.10-3.5.12. New York: John Wiley & Sons, Inc.
  2. Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (2nd ed.), 5.44-5.47. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
  3. Dale, R. et al. (1985). Plasmid. 13, 31-40.
  4. Kunkel, T.A. et al. (1987). Methods Enzymol.. 154, 367-382.
  5. Panet, A. et al. (1973). Biochemistry. 12, 5045-5050.

操作说明、说明书 & 用法

• 操作说明

  1. Protocol for blunting ends by 3’ overhang removal and 3’ recessed (5’ overhang) end fill-in using T4 DNA Polymerase (M0203)

• 使用指南

  • Activity of DNA Modifying Enzymes in rCutSmart™ Buffer

工具 & 资源

• 选择指南

  • Blunting Selection Chart
  • Common Applications for Exonucleases and Endonucleases
  • DNA Polymerase Selection Chart

• Web 工具

  • NEBcloner^®

FAQs & 问题解决指南

• FAQs

  1. Can T4 DNA Polymerase be used in other NEBuffers and rCutSmart Buffer?
  2. Can T4 DNA Polymerase be used to blunt DNA?
  3. Can T4 DNA Polymerase be used to fill in 3′ overhangs?
  4. Can T4 DNA Polymerase be used to remove 5′ overhangs?
  5. Can T4 DNA Polymerase be heat inactivated?
  6. Are the nucleotides needed to remove a 3′ overhang using T4 DNA Polymerase?
  7. What are the main causes of blunting reaction failure using T4 DNA Polymerase?
  8. Can T4 DNA Polymerase be used in labeling reactions and partial fill in reactions?
  9. Is T4 DNA Polymerase active at room temperature?
  10. Is T4 DNA Polymerase the enzyme of choice for removing 3′ overhangs and filling in 5′ overhangs (3′ recessed ends)?
  11. Are NEB DNA Polymerases supplied with dNTPs?
  12. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?

• 实验技巧

  酶过量、温度高于 12℃ 或 dNTP 浓度过低会导致 3’→5’ 核酸外切酶过度降解，从而阻碍平末端的形成。