OneTaq® 一步法 RT-PCR 试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒为终点检测 RNA 提供了高效、灵敏的检测方法。使用基因特异性的引物将 cDNA 合成和 PCR 反应放在单管中完成，大大简化 RT-PCR 操作步骤。

该试剂盒包含三种优化的混合液：OneTaq 一步法酶混合液、OneTaq 一步法反应混合液和 OneTaq 一步法 Quick-Load 反应混合液。酶混合液包含 ProtoScript II 反转录酶、小鼠 RNase 抑制剂和 OneTaq 热启动 DNA 聚合酶。ProtoScript II 反转录酶是 M-MuLV 反转录酶的突变体，其降低了 RNase H 活性且提高了热稳定性。OneTaq 热启动 DNA 聚合酶是热启动 Taq DNA 聚合酶和一个有校读功能的 DNA 聚合酶的混合液，无需优化就可得到高产量扩增产物。 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒最长扩增长度达 9 kb。

试剂盒配有两种优化的反应混合液：OneTaq 一步法反应混合液和 OneTaq 一步法 Quick-Load 反应混合液。反应混合液为 cDNA 合成和 PCR 扩增提供稳定的反应条件。独特的 OneTaq 一步法 Quick-Load 反应混合液包含染料，不仅在建立反应时起到指示作用，还可直接凝胶上样。

总 RNA 和 mRNA 均可作为模板。该试剂盒单次反应能检测到低至 0.1 pg 的 GAPDH 基因。检测靶 RNA 长达 9 kb。OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒 一次可对 2 至 3 个靶基因进行多重检测。

图 1：检测不同长度的 RNA 模板。OneTaq® 一步法 RT-PCR 试剂盒 |
按照标准操作流程，在 50 μl 反应体系中加入约 100 ng 来源于 Jurkat 细胞总 RNA。目标序列大小为泳道 1：0.7 kb，泳道 2：1.1 kb，泳道 3：1.9 kb，泳道 4：2.3 kb，泳道 5：2.5 kb，泳道 6：5.5 kb，泳道 7：7.6 kb，泳道 8：9.3 kb。Marker（M）为 Quick-Load 1 kb Plus DNA Ladder（NEB #N0469）。
图 2：可灵敏检测低至 1 pg 的 RNA。OneTaq® 一步法 RT-PCR 试剂盒 |
按照标准操作流程，在 50 μl 反应体系中加入梯度稀释的来源于 HeLa 细胞总 RNA（泳道 1：1 μg，泳道 2：100 ng，泳道 3：10 ng，泳道 4：1 ng，泳道 5：100 pg，泳道 6：10 pg，泳道 7：1 pg，泳道 8：0.1 pg）。Marker（M）为 Quick-Load 1 kb Plus DNA Ladder（NEB #N0469）。
产品类别:
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR,
RT-PCR & cDNA Synthesis,
PCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E5315S     -20    
        OneTaq One-Step Enzyme Mix M1203AVIAL -20 1 x 0.06 ml 25 X
        OneTaq One-Step Reaction Mix M1204AVIAL -20 1 x 0.8 ml 2 X
        Quick-Load® OneTaq One-Step Reaction Mix M1205AVIAL -20 1 x 0.8 ml 2 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable

  • 方法概述

    方法概述

    N/A

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    • m0368-protoscript-ii-reverse-transcriptase
    • Quick-Load® 紫色 1 Kb Plus DNA Ladder
    • 小鼠 RNase 抑制剂
    • OneTaq® 热启动 DNA 聚合酶
    • dNTP 混合液

  • 参考文献

    1. Liao, J. and Gong, Z. (1997). Biotechniques. 23, 368-370.
    2. Sambrook, J. and Russel, D.W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Ed.). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
    3. Sellner, L N. and Turbett, G. R. (1998). Biotechniques. 25, 230-234.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Reaction Conditions (E5315)
    2. Standard PCR Protocol (E5315)
    3. One-Step RT-PCR Protocols (E5315)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE5315

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How do I choose between One-Step RT-PCR and Two-Step RT-PCR protocols?
    2. What’s the difference between NEB #E6560 and NEB #E5315?
    3. How does One-Step RT-PCR kit protocol work for NEB #E5315?
    4. Can I use a 25 μl reaction volume rather than a 50 μl reaction volume using NEB #E5315?
    5. What conditions should I use for cDNA synthesis?
    6. Do I need to optimize the reaction components?
    7. How much RNA template should I use?
    8. How should I design my primers?
    9. What’s the recommended primer concentration?
    10. How many PCR cycles should I do?
    11. How do I choose between LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit and OneTaq One-Step RT-PCR Kit (NEB #E5315)?