AbaSI |NEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

识别序列：x 为 ghmC、hmC、mC 或 C

AbaSI 是一种 DNA 修饰依赖型核酸内切酶，是经 EpiMark® 验证过的产品。AbaSI 可在双链 DNA 中识别 5-葡糖基羟甲基胞嘧啶（5ghmC）。它还可以识别 5-羟甲基胞嘧啶（5hmC），但效率较低。它无法识别 5-甲基胞嘧啶或胞嘧啶未经修饰的 DNA。AbaSI 可选择性地对包含经修饰碱基、5ghmC 或 5hmC 的 DNA 进行单链或双链酶切，并能在修饰的胞嘧啶 3´ 端较远位置进行切割，形成一个 2-3 碱基的 3´ 突出末端。在相反链带有两个 5ghmC 位点的酶切效率最高；带有 5ghm C 和其他 C 或 5mC 位点的酶切效率相对较低。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带来自鲍氏不动杆菌属（Acinetobacter baumannii）SDF 的合成 AbaSI 基因。

产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 μl 的总反应体系中，25℃ 下，1 小时内酶切 1 μg T4 野生型噬菌体 DNA（ghmC 经完全修饰）所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Supplement with 1 mM DTT
    Incubate at 25°C

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ r1.1: 25%
    NEBuffer™ r2.1: 50%
    NEBuffer™ r3.1: 50%
    rCutSmart™ Buffer: 100%

    稀释兼容性

    • 稀释液 C

    贮存溶液

    100 mM KCl
    10 mM Tris-HCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.5% Tween® 20
    0.5% IGEPAL® CA-630
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

    甲基化敏感性

    dam 甲基化: 不敏感
    dcm 甲基化: 不敏感
    CpG甲基化: 不敏感

    在不同温度下的活性

    @37°C: 0%

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    • T4 噬菌体 β-葡糖基转移酶（T4-BGT）
    • MspJI
    • t1010-monarch-plasmid-miniprep-kit
    • Monarch® DNA 胶回收试剂盒
    • Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒（5 μg）

  • 注意事项

    1. 可能需要优化酶量以完整酶切基因组 DNA。
    2. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Glucosylation and digestion of Genomic DNA using AbaSI (#R0665)
    2. Restriction Digest Protocol
    3. Double Digest Protocol with Standard Restriction Enzymes

  • 使用指南

    • Restriction Enzyme Tips

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Isoelectric Points (pI) for Restriction Enzymes
    • NEB Diluent and Buffer Table

  • Web 工具

    • Double Digest Finder
    • Enzyme Finder
    • NEBcutter™ v3.0
    • NEBioCalculator®
    • REBASE®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does AbaSI cut hemi-glucosylated CpG site?
    2. How do I know my DNA is cut?
    3. How much enzyme should be used in digesting genomic DNA?
    4. Is this enzyme sensitive to dam, dcm or mammalian CpG methylation?
    5. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?