抗微管蛋白（甘氨酰化），多克隆抗体（Gly-pep1）

anti-Tubulin (glycylated), pAb (Gly-pep1)

 

 

产品编号	产品名称	包装
AG-25B-0034-C100	抗微管蛋白（甘氨酰化），多克隆抗体（Gly-pep1）     anti-Tubulin (glycylated), pAb (Gly-pep1)	100 μg

 

◆产品规格

产品详情
产品类别	多克隆抗体
来源/宿主	兔
免疫原/抗原	对应于人微管蛋白β-2A链的D431EQGEFE（G-COOH*）EEEG441-NH2  （*从谷氨酸的γ-羧基分支的甘氨酸作为异肽键）的合成肽。
应用	Western Blot: (1：10,000)
	免疫组化: (1：5,000)
	免疫共沉淀: (1：200)
交叉反应	狗
	人
	小鼠
特异性	该抗体识别单糖或双糖化微管蛋白。培养细胞中的甘氨酰酶（TTLL3和TTLL8）的活性主要   导致α-和β-微管蛋白的修饰，但也导致其他尚未鉴定的蛋白质底物被抗体Gly-pep1检测   到。在免疫荧光标记中，该抗体强烈标记甘氨酰化微管（Gadadhar等，2017）。
纯度	≥95% (SDS-PAGE)
纯化详情	表位亲和纯化
浓度	1 mg/mL
规格	液体。在含有0.02％叠氮化钠的PBS中保存。
Accession Number	Q13885
运输及储存
运输	蓝冰
短期存储	+4°C
长期存储	-20°C
储存建议	重新配制后，建议分装并储存于-20°C。
	避免反复冻融。
使用/稳定性	收到产品后可在-20℃稳定保存至少6个月。

 

◆产品描述

　　微管是在所有真核细胞中都能发现的关键细胞骨架元件。一般认为是通过“微管蛋白密码”调控机制来生成不同特性的微管，从而使微管能实现多种不同功能。标记微管的一种机制是通过各种各样的微管蛋白翻译后修饰（PTM）。其中一种修饰方式是甘氨酰化，通过将二级甘氨酸链（支链）添加到蛋白质的主肽链产生。这些支链的长度可以从一个到二十个以上的甘氨酸残基不等。甘氨酰化由来自微管蛋白酪氨酸连接酶样（TTLL）家族的酶TTLL3，TTLL8和TTLL10催化。尤其是TTLL3和TTLL8对于甘氨酰化起始是必需的，因为它们产生初始的甘氨酸链。
　　Gly-pep1抗体是通过模拟β2-微管蛋白（TUBB2A）在E437位点上带有单甘氨酸链的多肽而制备的抗体。本抗体可以特异性地检测甘氨酰化的微管蛋白，以及在细胞以及组织中的其他未知的甘氨酰化底物。因微管的甘氨酰化主要在纤毛和鞭毛中发生，Gly-pep1还可以标记能动的纤毛以及原纤毛（Gadadhar等，2017）。

 

◆参考文献

Tubulin glycylation controls primary cilia length: S. Gadadhar, et al.; J. Cell Biol. (Article in press) (2017)

 

◆实验数据

 

 

　　使用抗微管蛋白（甘氨酰化），多克隆抗体（Gly-pep1）（产品编号AG-25B-0034）进行蛋白质甘氨酰化的免疫印迹分析。实验方法：在标准条件下培养HEK-293T细胞，转染表达甘氨酰酶TTLL3和TTLL8的质粒，并在10％SDS-PAGE上进行电泳。使用小鼠睾丸的裂解液作为甘氨酰化微管蛋白的阳性对照。将蛋白转至NC膜并进行免疫印迹检测，以抗微管蛋白（甘氨酰化）多克隆抗体（Gly-pep1）（1：20,000）在含0.1％Tween-20的TBS（TBS-T）中进行洗涤，在含2.5％脱脂牛奶的TBS-T中进行抗体孵育。在未转染的HEK-293T细胞提取物中，即使在高度曝光下也检测不到微管蛋白。在TTLL3甘氨酰酶表达后，主要是β-微管蛋白被Gly-pep1检测出来，同时，TTLL8表达产生了Gly-pep1阳性的 α-微管蛋白以及其他尚未鉴定的底物。睾丸裂解液也含有不同甘氨酰化蛋白的异质混合物，包括α和β-微管蛋白。图片由巴黎居里研究所的Sudarshan Gadadhar和Carsten Janke提供。

 

 

　　使用抗微管蛋白（甘氨酰化）多克隆抗体（Gly-pep1）（产品编号AG-25B-0034）对多纤毛室管膜细胞和带有初级纤毛的细胞进行免疫荧光染色。 实验方法：从新生野生型小鼠分离的放射状神经胶质细胞和血清饥饿诱导MDCK细胞系的纤毛发生。用微管稳定化方法固定细胞并用抗微管蛋白（甘氨酰化）多克隆抗体（Gly-pep1）（1:5,000；红色），抗α-微管蛋白（乙酰化）多克隆抗体（TEU318）（AG-20B -0068）（绿色）和DAPI（蓝色）染色。在纤毛上观察到Gly-pep1特异性染色。图片由巴黎居里研究所的Sudarshan Gadadhar和Carsten Janke提供。

 

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