α1-3,4 岩藻糖苷酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

 

产品来源

该酶克隆自扁桃（Prunus dulcis），在毕赤酵母（Pichia pastoris）中表达。

特异性

α1-3,4 岩藻糖苷酶 |
产品类别:
Exoglycosidases Products,
Proteome Analysis Products

应用:
Expression Systems,
Glycan Sequencing,
Proteomics,

Recombinant Glycoprotein Expression,

Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0769S     4    
        α1-3,4 Fucosidase P0769SVIAL 4 1 x 0.05 ml 4,000 units/ml
        GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
        Recombinant Albumin (Low-glycerol) B9203SVIAL -20 1 x 0.25 ml 10 mg/ml

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 10 μl 总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Galβ1-4GlcNAcβ1-3(Fucα1-3)Galβ1- 4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的 α-岩藻糖水解所需的酶量。

    反应条件

    1X GlycoBuffer 1
    Supplement with 100 µg/ml Recombinant Albumin (Low-glycerol)
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 1
    5 mM CaCl2
    50 mM sodium acetate
    (pH 5.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    50 mM NaCl
    1 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    分子量

    实际: 56000 Da

    比活度

    75,000 unit/mg

    单位活性检测条件

    在 10 μl 反应体系中，将两倍稀释的 a1-3,4 岩藻糖苷酶与 1 nmol AMC 标记底物在添加有 1X BSA 的 1X GlycoBuffer 1 中进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（1）。

  • 参考文献

    1. Wong-Madden, S. T. and Landry, D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Typical Reaction Conditions for α1-3, 4 Fucosidase (P0769)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • Glycan Analyzer

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the difference between α1-2 Fucosidase, α1-3,4,6 Fucosidase and α1-3,4 Fucosidase?
    2. Can I use α1-3,4 Fucosidase in a double digest with other exoglycosidases and/or endoglycosidases?
    3. Can α1-3,4 Fucosidase cleave core α1-3 fucose residues?
    4. Can α1-3,4 Fucosidase and α1-2,3,4,6 Fucosidase cleave branched and complex substrates?
    5. What are Glycosidases and their uses?
    6. Do detergents inhibit glycosidases?
    7. What is a good method to re-purify a glycan or glycopeptide after exoglycosidase treatment?
    8. Does this enzyme require denaturing conditions to act on glycoproteins?
    9. How much exoglycosidase should be used?

  • 实验技巧

    • 反复冻融会降低酶活性。推荐贮存温度为 4℃。
    • 1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。
    • 从复杂 N-糖链中去除 α1-3 和 α1-4 岩藻糖残基，可能需要提高酶的浓度和延长温育时间。
    • α1-3,4 岩藻糖苷酶可以切割 N-连接糖链外臂上的 α1-3 岩藻糖，但无法去除核心 α1-3 岩藻糖残基。
    • 贮存缓冲液不包含 BSA；建议在反应中添加 BSA 以保持最佳酶活性。