β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f 是 β-N-乙酰氨基己糖苷酶（1）和麦芽糖结合蛋白融合表达的重组蛋白。具有与 β-N-乙酰氨基葡糖苷酶相同的活性。β-N-乙酰氨基葡糖苷酶 f 可催化水解寡糖末端 β-D-N-乙酰氨基半乳糖及氨基葡糖残基。β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f 可用于去除 O-GlcNAc（丝氨酸/苏氨酸上的 N-乙酰氨基葡糖苷酶）（4）。

底物特异性： β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f |
β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f |

重点

  • 表观遗传学应用：O-GlcNac（连接丝氨酸或苏氨酸的 N-乙酰氨基己糖苷酶）是核蛋白功能的重要调节因子。β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f 可去除转录因子、组蛋白、RNA 结合蛋白等中的 O-GlcNAc。

产品来源

克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus），在 E. coli 中过表达。

产品类别:
Exoglycosidases Products

应用:
Glycan Sequencing,
Recombinant Glycoprotein Expression,
Glycoprotein Analysis

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • P0721S     -20    
        β-N–Acetylhexosaminidasef P0721SVIAL -20 1 x 0.1 ml 5,000 units/ml
        GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指 10 µl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol GalNAcβ1-4Galβ1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarin（AMC）中超过 95% 的末端 β-D-N-乙酰氨基半乳糖水解所需要的酶量。

    反应条件

    1X GlycoBuffer 1
    Incubate at 37°C

    1X GlycoBuffer 1
    5 mM CaCl2
    50 mM sodium acetate
    (pH 5.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    50 mM NaCl
    20 mM Tris-HCl
    5 mM EDTA
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    75°C for 10 minutes

    分子量

    理论上的: 100000 Da

    末端单糖

    • N-乙酰氨基半乳糖及 N-乙酰氨基葡糖残基

    单位活性检测条件

    在 10 µl 1X GlycoBuffer 1 反应体系中，将两倍稀释的 β-N-乙酰氨基己糖苷酶 f 与 1 nmol AMC 标记底物进行温育。反应混合液在 37℃ 条件下温育 1 小时。通过薄层色谱法观察反应产物的分离情况（3）。

  • 参考文献

    1. Robbins, P. et al. (1992). Gene. 111, 69-76.
    2. Guan, C. and Wong, S. New England Biolabs.. Unpublished observation
    3. Wong-Madden, S.T. and Landry D. (1995). Glycobiology. 5, 19-28.
    4. Magnelli, P.E. et al Methods Molecular Biology. 801, 189-211.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Typical Reaction Conditions for β-N-Acetylhexosaminidasef (P0721)

  • 使用指南

    • Glycobiology Unit Conversion Chart

  • 应用实例

    • Analysis of a Fusion Protein using the Protein Deglycosylation Mix II and Mass Spectrometry

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How much exoglycosidase should be used?
    2. Do detergents inhibit exoglycosidases/endoglycosidases?
    3. What is a good positive control for β-N-Acetylhexosaminidasef?
    4. What are Glycosidases and their uses?
    5. Why have the NEB Glycosidase enzymes changed reaction buffers? What are the new reaction buffers and can I still use an enzyme with its old buffer? Where can I find the composition of the old buffers?
    6. How much exoglycosidase should be used?

  • 实验技巧

    ßpNP-GlcNAc 是 Hexf 的阳性对照底物。

    1 µg 糖蛋白或 100 nM 寡糖反应 1 小时，酶的最佳起始量范围为 1-2 µl。