Ph.D.™ 多肽展示克隆系统 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

M13KE 是一种简单的 M13 衍生物，其中引入的克隆位点位于基因 III 的 5´ 末端，可将短肽序列展示为 N 端 pIII 融合蛋白。由于这是噬菌体而非噬菌粒载体，每个病毒颗粒表面上 pIII 的全部 5 个拷贝都将与克隆肽融合。展示肽长度超过 20 – 30 个氨基酸会对 pIII 的感染力产生有害影响，因此该载体仅适合展示短肽。此外，该载体未携带质粒复制子或抗生素抗药性，因此必须将载体作为噬菌体扩增而非质粒（即测定噬菌斑数量而不是菌落数量）。这样大幅简化了淘选过程中的中间扩增步骤，因为无需在涂板前表达抗生素基因，也无需在扩增期间使用辅助噬菌体。下面概述了将肽库克隆到 M13KE 中所需的步骤。如需克隆单一肽序列，可按比例缩减反应体系。

图 1
Ph.D.™ 多肽展示克隆系统 |
在 M13KE 中构建肽库。示意图展示了肽克隆位点序列，以及肽库的设计方式和将库克隆到 M13KE 的方式。延伸引物序列已标出。N = A、G、C 或 T；X = 用户定义的或随机氨基酸。
产品类别:
Phage Display Products

应用:
Phage Display

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E8101S     -20    
        M13KE gIII Cloning Vector N3541SVIAL -20 1 x 20 µg 1 mg/ml
        M13 Extension Primer S1203AVIAL -20 1 x 2,150 pmol 40 pmol/μl

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  • 参考文献

    1. Sambrook, J. and Russell D.W (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.). Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor Laboratory Press.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for Cloning Peptide Display Libraries in M13KE
    2. M13 Amplifcation Protocol for Ph.D. Phage Display
    3. M13 Titer Protocol for Ph.D. Phage Display
    4. Transfection of M13 DNA Protocol

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE8101

  • 应用实例

    • Ph.D.™ Peptide Display Cloning System

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Can cDNA libraries be cloned into M13KE?
    2. Can I display antibody fragments or proteins at the N-terminus of pIII coat protein with M13KE? 
    3. What are the differences between pIII and pVIII display?
    4. Does the Ph.D.™ Phage Display Cloning System come with double-stranded DNA vector?
    5. What type of strain do I use with the Ph.D.™ Phage Display Cloning System?
    6. I have done all the standard troubleshooting for my cloning and transfection steps and I still cannot get the desired clone in M13KE?

  • 问题解决指南

    • Phage Display Troubleshooting Guide