pSNAP-tag® (T7)-2 载体 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

pSNAP-tag® (T7)-2 载体是编码 SNAP-tag 蛋白的大肠杆菌表达质粒。表达受 IPTG 诱导的 T7 启动子调控。pSNAP-tag® (T7)-2 载体也可以作为 SNAP-tag 蛋白（20 kDa）表达的对照质粒。靶基因可被克隆作为融合蛋白表达在 SNAP-tag 的 N 端或 C 端。

SNAP-tag 是用于蛋白研究的新型工具，能将目标蛋白以共价结合的形式，特异性地标记上任何分子。SNAP-tag 是一种基于人烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（human O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase hAGT）的蛋白（1，2，3）。SNAP-tag 的底物是苄基嘌呤和苄基氯嘧啶的衍生物。在标记反应中，底物的苄基部分被替换，与 SNAP-tag 形成共价结合。

该体系包括两个步骤：亚克隆并表达目标蛋白为 SNAP-tag 融合蛋白，以及使用所选的 SNAP-tag 底物标记融合蛋白。有关 SNAP-tag 融合蛋白的克隆和表达，请参阅操作说明。在 SNAP-tag 底物的说明书中描述了如何使用 SNAP-tag 底物进行融合蛋白标记。

pSNAP-tag®(T7)-2 载体的克隆区域 pSNAP-tag® (T7)-2 载体 |
pSNAP-tag® (T7)-2 载体 |


编码链上显示了在 SNAP26b 基因 两侧区域的仅有一个识别位点的限制性内切酶。

产品类别:
Cellular Analysis Vectors Products,
DNA Plasmids & Substrates Products,
Protein Labeling Products

应用:
Snap Surface Products,
Pulse Chase,
In vivo Imaging,

Receptor Internalization,
Protein Localization,

Protein Labeling Snap Clip

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N9181S     -20    
        pSNAP-tag® (T7)-2 Vector N9181SVIAL -20 1 x 0.04 ml 500 µg/ml

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • IPTG 诱导大肠杆菌菌株：T7 表达
    • T7 表达 lq 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3016）
    • T7 表达 lysY 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3010）
    • T7 表达大肠杆菌感受态细胞（NEB #C2566）
    • T7 表达 lysY/lq 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3013）

    序列文件

    Fasta GenBank

  • 优势和特性

    Features

    背景：

    该质粒编码 SNAP26b基因，SNAP26b 是人源烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase,hAGT）的突变体形式。（与野生型 hAGT 相比，SNAP-tag 蛋白包含 C26A、K125A、A127T、R128A、G131K、G132T、M134L、R135S、C150S、N157G、S159E 突变位点，在 G182 位点后被截短）。该基因的密码子经优化可用于在大肠杆菌中的表达。在质粒序列中，SNAP26b 基因编码区域为 5767 bp 至 6311 bp 处。该基因两侧没有额外的纯化标签。质粒含有 pBR322 的 pMB1 的复制起点，与 pBR322 载体具有相似的拷贝数（在 20 拷贝/细胞的中至低拷贝数水平）。编码有氨苄青霉素抗性基因。

    该质粒旨在作为 SNAP-tag 基因在大肠杆菌菌株中融合表达载体。该菌株需要提供 T7 聚合酶，以实现基因上游 T7 启动子的表达（4）。pSNAP-tag®(T7)-2 载体中 SNAP-tag 的表达已经在 NEB 提供的以下大肠杆菌菌株中进行了测试：T7 表达大肠杆菌感受态细胞（NEB #C2566），T7 表达 lq 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3016），T7 表达 lysY 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3010）和 T7 表达 lysY/lq 大肠杆菌感受态细胞（NEB #C3013）。我们建议使用 T7 表达菌株进行融合基因表达的初步检测。

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  • 注意事项

    1. 贮存条件：pSNAP-tag® (T7)-2 载体保存于 0.5 µg/µl 的 TE 缓冲液（10 mM Tris-HCl，pH 8.0，1 mM EDTA）中。质粒溶液在 4℃ 条件下贮存可长达一周。建议于 -20℃ 条件下长期贮存。

  • 参考文献

    1. Keppler, A. et al. (2003). Nat. Biotechnol. 21, 86.
    2. Gautier, A. et al. (2008). Chem. Biol. 15, 128.
    3. Keppler, A. et al. (2004). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 9955.
    4. Dubendorff, J.W. and Studier, F.W. (1991). J. Mol. Biol. 219, 45.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Expression of SNAP-tag Fusions (N9181)
    2. Cloning of SNAP-tag Fusions in pSNAP-tag(T7)-2 (N9181)

  • 应用实例

    • Labeling of Escherichia coli Expressed SNAP-tag® Fusion Proteins

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Comparison of SNAP-tag®/CLIP-tag™ Technologies to GFP
    • SNAP-tag®/CLIP-tag® Cloning Vector Selection Chart

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Cellular Imaging and Analysis FAQs
    2. What is the DNA sequence of this product?

  • 问题解决指南

    • Labeling with SNAP-tag® Technology Troubleshooting Guide