pTYB21 载体 |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

IMPACT 引用文献

pTYB21 是一种大肠杆菌克隆和表达载体（7514 bp），用于 IMPACT™ 蛋白纯化系统，能够以与可自切割的亲和标签形成的融合蛋白的形式,对目标蛋白（1,2）进行过表达。这是一种 N 末端融合载体，设计用于将目标基因框内插入到内含肽标签（Sce VMA 内含肽/几丁质结合域，55 kDa）下游的多克隆位点区（3,4）。可实现目标蛋白的 N 端与内含肽标签融合表达。内含肽的自切割活性能够从与几丁质结合的内含肽标签上释放目标蛋白，从而实现目标蛋白的单柱纯化。

将此载体与 C 端融合载体结合使用，可测试哪种融合蛋白构建（N 端或 C 端）能最大化目标蛋白的表达和产量。要实现目标蛋白 C 端与内含肽标签的融合表达，可使用 pTXB1（NEB #N6707）、pTXB3（NEB #N6708）、pTYB1（NEB #N6701）、pTYB2（NEB #N6702）、pTYB3（NEB # N6703）或 pTYB4（NEB #N6704）。

pTYB21 载体 |
产品类别:
IMPACT System,
Bacterial E. coli Protein Expression Products,
DNA Plasmids & Substrates Products,

Protein Expression Products

应用:
Protein Expression in E. Coli,
Protein Expression

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • N6709S     -20    
        pTYB21 Vector N6709SVIAL -20 1 x 0.05 ml 200 µg/ml

  • 特性和用法

    亲和标签

    几丁质结合域（CBD）

  • 优势和特性

    Features

    • 多克隆位点（MCS）与 pMAL 蛋白融合和纯化系统（NEB #E8200）中以及 K. lactis 蛋白表达试剂盒（NEB #E1000）中载体的多克隆位点兼容。
    • 使用 MCS 中的 SapI（或 BspQI）位点克隆目标基因的 5´ 末端时，目标蛋白的 N 端紧邻内含肽切割位点。纯化得到的目标蛋白，在 N 端不含任何额外的来源于载体的残基。使用 SapI 将目标基因克隆到 MCS 后，SapI 的识别序列会丢失；因此，无法使用 SapI 重新切割载体。如需了解详细信息，请参阅 IMPACT 说明书。
    • NdeI 用于克隆目标基因的 5’ 末端时，会在目标蛋白的 N 端添加额外的氨基酸（Gly-Arg-Ala-His）。
    • 反向引物中应包含一个终止密码子。
    • 具有 ColE1 复制起点的 pBR322 衍生载体。
    • 融合基因的表达受 T7/lac 启动子控制，并且因 lacI 基因（5）的存在而能够被 IPTG 诱导表达。
    • 表达需要大肠杆菌宿主菌株携带 T7 RNA 聚合酶基因 [例如，T7 表达 E. coli 感受态细胞（NEB #C2566）或 BL21(DE3) E.coli 感受态细胞（NEB #2527）及其衍生菌株]。
    • 氨苄青霉素抗性。
    • 使用 pTYB21 或 pTYB22 时，有一小段肽（15 个氨基酸，1.6 kDa）同样会从内含肽标签上切割下来，并与目标蛋白共同洗脱。虽不能通过常规 SDS-PAGE 检测到，但可以透析除去。
    • 由于源于噬菌体 M13 的 DNA 复制起点，能够通过辅助噬菌体对携带质粒的细胞进行超染，从而产生单链 DNA。M13KO7 辅助噬菌体（NEB #N0315）可以购买获得。
    • 可使用其它 IMPACT 载体将目标基因融合到内含肽的 N 端或 C 端，并且可以通过硫醇试剂或温度/pH 变化来诱导切割反应。
    • 内含肽正向引物（NEB #S1263）和 T7 终止子反向引物（NEB #S1271）可用于目标基因测序。

  • 相关产品

    相关产品

    • T7 表达 E. coli 感受态细胞（高效级）
    • BL21(DE3) E. coli 感受态细胞

  • 参考文献

    1. Chong, S., Montello, G.E., Zhang, A., Cantor, E.J., Liao, W., Xu, M.-Q., Benner, J. (1998). Utilizing the C-terminal cleavage activity of a protein splicing element to purify recombinant proteins in a single chromatographic step. Nucl. Acids Res. 26, 5109-5115.
    2. Chong, S., Mersha, F.B., Comb, D.G., Scott, M. E., Landry, D., Vence, L.M., Perler, F.B., Benner, J., Kucera, R.B., Hirvonen, C.A., Pelletier, J.J., Paulus, H., and Xu, M.-Q. (1997). Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavableaffinity tag derived from a protein splicing element. Gene. 192, 277-281.
    3. Chong, S., Williams, K.S., Wotkowicz, C., and Xu, M.Q. (1998). Modulation of protein splicing of the Saccharomyces cerevisiae vacuolar membrane ATPase intein. J. Biol. Chem. 273, 10567-77.
    4. Watanabe, T., Ito, Y.,Yamada, T., Hashimoto, M., Sekine, S., and Tanaka, H. (1994). The role of the C-terminal domain and type III domains of chitinase A1 from Bacillus circulans WL-12 in chitin degradation. J. Bacteriol. 176, 4465-4472.
    5. Dubendorff, J. W. and Studier, F. W. (1991). Controlling basal expression in an inducible T7 expression system by blocking the target T7 promoter with lac repressor. J. Mol. Biol. 219, 45-49.

操作说明、说明书 & 用法

  • 应用实例

    • Intein-Mediated Protein Ligation IPL and Labeling with the IMPACT™ Kit

工具 & 资源

  • 选择指南

    • IMPACT™ Vectors and Applications

  • Web 工具

    • DNA Sequences and Maps Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the DNA sequence of this product?