EcoGII 甲基转移酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

多种底物的 EcoGII 甲基化

底物 甲基化百分比*
DNA 底物1
质粒 DNA > 75%
基因组 DNA > 50%
双链 DNA 寡核苷酸 > 50%
单链 DNA 寡核苷酸 > 50%
DNA/RNA 杂交体 > 50%
RNA 底物2
总 RNA 5 – 10%
mRNA（体外转录） 5 – 10%
DNA/RNA 杂交体 5 – 10%


*甲基化反应条件：37℃ 条件下，在补充了 160 µM SAM 的 1X rCutSmart™ 缓冲液中，使用 5 U EcoGII 甲基转移酶对 1 µg 底物进行甲基化，时长 60 分钟。甲基化之后，进行柱纯化，酶切成核苷，并通过 LCMS 分析测定 N6mA 与 A 的比率（甲基化百分比）。

1 测试底物包括：质粒 DNA（pBR322 #N3033、pUC19 #N3041）、基因组 DNA（人胚肾细胞（HEK293）、小鼠耳朵和尾巴、大鼠肝和肾、λ DNA（dam-）#N3013）、双链 DNA 寡核苷酸（80 个核苷酸）、单链 DNA 寡核苷酸（60 个核苷酸）、DNA/RNA 杂交体（80 个核苷酸）、总 RNA（HeLa 细胞 RNA、小鼠肾 RNA、大鼠脑 RNA）、mRNA（体外转录的 1.8 kb FLuc mRNA）。

2使用较少的底物（250 ng）且增加酶的用量（15 U），甲基化水平可达 20% 以上。

减少底物量、增加酶量和/或延长甲基化反应时间，可提高甲基化水平。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带克隆自大肠杆菌（菌株 C227-11）（1）的 EcoGII 甲基转移酶基因。

产品类别:
Methyltransferases for Epigenetics Products,
Methyltransferases Products

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0603S     -20    
        EcoGII Methyltransferase M0603SVIAL -20 1 x 0.04 ml 5,000 units/ml
        rCutSmart™ Buffer B6004SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
        S-adenosylmethionine (SAM) B9003SVIAL -20 1 x 0.1 ml 32 mM

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 37℃ 条件下，20 µl 反应体系中，30 分钟内能保护 100 ng FAM 标记的双链 DNA 不被 MboI 限制性内切酶切割所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    Supplement with 160 µM S-腺苷甲硫氨酸（SAM）
    Incubate at 37°C

    1X rCutSmart™ 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    250 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    0.15% Triton® X-100
    180 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    65°C for 10 minutes

    单位活性检测条件

    EcoGII 甲基转移酶与 100 ng FAM 标记的双链 DNA 底物（80 bp）在 20 µl 补充了 160 µM SAM 的 1X rCutSmart 缓冲液中于 37℃ 温育 30 分钟，后于 65℃ 温育 10 分钟。保护能力的测定是通过添加 5 个单位的 MboI 限制性内切酶（37℃ 温育 30 分钟，65℃ 温育 20 分钟）到体系中，用毛细管电泳分析法解析反应产物、确定已切割和未切割的产物并定量其丰度。

  • 相关产品

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    • S-腺苷甲硫氨酸（SAM）

  • 注意事项

    1. SAM 贮存要求：S-腺苷甲硫氨酸（Sigma Catalog #A7007）以溶解在 0.005 M 硫酸和 10% 乙醇的 32 mM 溶液形式贮存于 –20℃。满足这些条件时，SAM 可稳定保存长达六个月的时间。SAM 在 37℃，pH 7.5 的条件下不稳定（2）；因此，当反应温育时间超过 4 小时，需补充 SAM。
    2. 当用于甲基化反应时，SAM 应在 H2O 中按 1:200 比例稀释至 160 µM 的终浓度。
    3. EcoGII 甲基转移酶对盐敏感。确保 DNA 溶液含盐量低，或者只占最终反应体积较低的比例。如果盐对实验有影响，通过点滴透析降低盐浓度。

  • 参考文献

    1. Fang, et al (2012). Nature Biotechnology. 30, 1232-1239.
    2. Hoffman, J.L. (1986). Biochemistry. 25, 4444-4449.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Recommended Protocol for 3H labeling of DNA
    2. Recommended Protocol for Methylation of Genomic DNA

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Will any NEB methyltransferases (methylases) work on RNA?
    2. What is the activity of EcoGII Methyltransferase at temperatures other than 37°C?
    3. Is S-adenosylmethionine (SAM) supplied with the Methyltransferase?
    4. Does EcoGII Methyltransferase require BSA?
    5. Does EcoGII Methyltransferase require MgCl2?
    6. What is the activity of EcoGII Methyltransferase in other buffers?
    7. What is the molecular weight of EcoGII Methyltransferase?
    8. Can EcoGII Methyltransferase be heat inactivated?
    9. Is EcoGII Methyltransferase sensitive to salt?
    10. Will EcoGII Methyltransferase methylate ssDNA?
    11. Will EcoGII Methyltransferase methylate DNA/RNA hybrids?
    12. Will EcoGII Methyltransferase methylate gDNA?
    13. Will EcoGII Methyltransferase methylate RNA?
    14. Will EcoGII methylation block restriction enzymes? 
    15. How can I increase methylation of my substrate by EcoGII Methyltransferase?
    16. Can I purchase large amounts of an existing Enzyme for Innovation?
    17. What are Enzymes for Innovation?
    18. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?