T7 核酸内切酶 I |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

T7 核酸内切酶 I 能够识别并切割不完全配对的 DNA、十字形结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链 DNA，也能以较慢速度切割带切刻的双链 DNA。切割位点位于错配碱基 5´ 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。该蛋白是 T7 基因 3 的产物。

重点

  • 从重组酶中分离
  • 随附 10X 反应缓冲液
  • 识别不完全配对的 DNA

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有麦芽糖结合蛋白（MBP）和 T7 核酸内切酶 I（T7 Endo I）的融合基因。

产品类别:
Mutation Detection Reagents and Kits Products,
Genome Editing Products,
Exonucleases and Non-specific Endonucleases Products,

DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

应用:
Whole Genome Amplification & Multiple Displacement Amplification,
Genome Editing Applications

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0302S     -20    
        T7 Endonuclease I M0302SVIAL -20 1 x 0.025 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X
    • M0302L     -20    
        T7 Endonuclease I M0302LVIAL -20 1 x 0.125 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ 2 B7002SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位指在 37℃ 条件下，总反应体积为 50 μl 时，1 小时能将超过 90% 的 1 μg 超螺旋十字形结构 pUC(AT) 转换为 90% 以上的线性结构所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ 2
    Incubate at 37°C

    1X NEBuffer™ 2
    50 mM NaCl
    10 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.9 @ 25°C)

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    200 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    0.15% Triton® X-100
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    否

  • 优势和特性

    应用特性

    • 分解四向交叉或分支 DNA
    • 检测或切割异源双链 DNA 和切刻的 DNA
    • 随机切割线性 DNA 进行鸟枪法克隆

  • 相关产品

    相关产品

    • EnGen® sgRNA 合成试剂盒，S. pyogenes

    单独销售的组分

    • NEBuffer 2

  • 注意事项

    1. T7 核酸内切酶 I 是一种具有结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。
    2. It is important to control the amount of enzyme and the reaction time used for cleavage of a particular substrate.
    3. 反应温度不得超过 42℃，以免增加非特异性核酸酶活性。
    4. pUC（AT）来自 pUC19，在其 EcoRI 位点和 PstI 位点之间的多聚接头处有修饰。

  • 参考文献

    1. Xu, M. -Q. and Evans, T.C. (2001). Methods. 24, 257-277.
    2. Parkinson, M.J. and Lilley. D.M.J. (1997). J. Mol. Biol.. 270, 169-178.
    3. White, M.F. et al. (1997). J. Mol. Biol.. 269, 647-664.
    4. Hadden, J.M. et al. (2001). Nat. Struct. Biol.. 8, 62-67.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Determining Genome Targeting Efficiency using T7 Endonuclease I

  • 使用指南

    • DNA Damage and PreCR

  • 应用实例

    • Determining Efficiency of On-Target CRISPR Cas9 Genome Editing Using the NEB® EnGen® Mutation Detection Kit on LabChip Gel Xpress

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Activities of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • DNA Repair Enzymes on Damaged and Non-standard Bases
    • Properties of DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases
    • Properties of Exonucleases and Non-specific Endonucleases

  • Web 工具

    • Exo Selector

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is there a way to inactivate T7 Endonuclease I?
    2. Does T7 Endonuclease I recognize single base pair mismatches?
    3. What common additives inhibit T7 Endonuclease I?
    4. What is the molecular weight of T7 Endonuclease I?
    5. What PCR reagents do you recommend for DNA amplification in genome editing (CRIPSR/Cas9,TALEN,ZFN) mismatch detection assays?
    6. Can I use T7 Endonuclease I genome editing (CRIPSR/Cas9,TALEN,ZFN) mismatch detection assays using unpurified PCR products?
    7. Can I use T7 Endonuclease I for genome editing applications?