T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ |NEB酶试剂 New England Biolabs

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品信息

T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr R55K，K227Q）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到 RNA 的 3´ OH 末端。该酶连接无需 ATP，但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr R55K，K227Q 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB# M0242）的双点突变体。T4 RNA 连接酶 2 中 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化（1）。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA（3）5´ 磷酸基的活性（3），K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 的非特异性连接（串联体和环）（2,3）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致（3）。

因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于高通量测序 Small RNA 的文库构建中，优化了接头的连接过程（4）。

产品来源

T4 Rnl2tr R55K，K227Q 携带有 MBP 融合表达的大肠杆菌质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前 249 个氨基酸序列，分别在 55 和 227 位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸，赖氨酸突变为谷氨酰胺。

产品类别:
RNA Ligation,
RT-PCR Products,
cDNA Synthesis & Reverse Transcriptases Products

应用:
RT-PCR & cDNA Synthesis,
PCR

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M0373S     -20    
        T4 RNA Ligase 2, truncated KQ M0373SVIAL -20 1 x 0.01 ml 200,000 units/ml
        T4 RNA Ligase Reaction Buffer B0216SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        PEG 8000 B1004SVIAL -20 1 x 1 ml 1 X
    • M0373L     -20    
        T4 RNA Ligase 2, truncated KQ M0373LVIAL -20 1 x 0.05 ml 200,000 units/ml
        T4 RNA Ligase Reaction Buffer B0216SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X
        PEG 8000 B1004SVIAL -20 1 x 1 ml 1 X

  • 特性和用法

    单位定义

    200 单位指 20 μl 总反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB #S1315）] 所需的酶量。

    5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUr CrArGrCrArArUrA-3´
    5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´

    反应条件

    1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
    Incubate at 25°C

    1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    1 mM DTT
    (pH 7.5 @ 25°C)

    贮存溶液

    10 ml Tris-HCl
    100 mM NaCl
    0.1 mM EDTA
    1 mM DTT
    50% Glycerol
    pH 7.5 @ 25°C

    热失活

    65°C for 20 minutes

    分子量

    理论上的: 71378.96 道尔顿

    比活度

    200,000 units/mg

    单位活性检测条件

    1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液，10%（w/v）PEG MW 8000，20 pmol 5´ FAM 标记的 RNA，40 pmol 预腺苷化 DNA 接头。25℃ 温育 1 小时后，在 15% 变性聚丙烯酰胺凝胶上检测到连接产物。

  • 优势和特性

    应用特性

    • 将预腺苷化 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3´ 端
    • 将腺苷化单链引物连接到 Small RNA 上，用于 cDNA 文库构建
    • 将腺苷化单链引物连接到 RNA 上，用于链特异性 cDNA 文库构建。

  • 相关产品

    相关产品

    • 小鼠 RNase 抑制剂

  • 注意事项

    1. 在我们的测试中，此连接酶可以与 T4 Rnl2tr（NEB# M0242）互换使用。通过添加 PEG 促进连接活性（参阅“常见问题解答”）。

  • 参考文献

    1. Yin, S., Ho, C.K. and Shuman S. (2003). J. Biol. Chem.. 278, 17601-17608.
    2. Hafner, M., et al. (2008). Methods. 44, 3-12.
    3. Viollet, S., et al. (2011). BMC Biotechnol. 11, 72.
    4. Zhuang, F., et al. (2012). Nucleic Acids Res.. 40(7), e54.

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Protocol for ligation of the 3´ OH of RNA to the 5´ pre-adenylated DNA with T4 RNA Ligase 2 truncated KQ (NEB #M0373)

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Properties of DNA and RNA Ligases
    • RNA Ligase Selection Chart
    • Substrate-based Ligase Selection Chart

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Is T4 RNA Ligase 2, truncated KQ different than T4 RNA Ligase 2, truncated K227Q?
    2. Are there differences in ligation efficiency for T4 RNA Ligase 2, truncated KQ, T4 RNA Ligase 2, truncated 227Q, and T4 RNA Ligase 2, truncated KQ?
    3. What can T4 RNA Ligase 2, truncated KQ ligate?
    4. Does PEG stimulate ligation efficiency?
    5. How can I increase ligation efficiency?
    6. Can T4 RNA Ligase 2, truncated KQ be used in other NEBuffers?
    7. The molecular weight of T4 RNA Ligase 2, truncated KQ is 71.6 kDa. Is it a fusion?
    8. Is PEG 8000 available for purchase?