Next® 文库定量试剂盒（Illumina®） |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

Next® 文库定量试剂盒（Illumina®） |

图 1：NEBNext 文库定量试剂盒的典型扩增和标准曲线

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图（A）是 NEBNext 文库定量试剂盒在 Bio-Rad CFX96 Touch 上的结果；图（B）是在 Applied Biosystems 7500 快速实时定量 PCR 仪器上的结果。左图显示扩增曲线，右图显示标准曲线。两种仪器都使用了默认设置。ABI 7500 快速分析包含 1X ROX（低浓度）和 ROX 标准品。

NEBNext 文库定量试剂盒优化了针对 Illumina 测序平台基于 qPCR 定量的组份。该试剂盒包含 P5 和 P7 Illumina 接头序列引物，以及一组 6 个高质量预稀释的 DNA 标准品，对 150 – 1,000 bp 之间稀释的 DNA 文库进行可靠的定量。

特性

  • 与其它方法和试剂盒相比，可提供更精准和可重复的定量结果
  • 兼容于通过多种方法制备的具有宽范围插入片段大小及 GC 含量的文库
  • 可根据实验需求灵活选择最佳标准曲线（4 个或 6 个标准品）
  • 提供使用方便的文库稀释缓冲液
  • NEBNext 文库定量预混液只需要加入引物
  • 无论插入片段大小如何，所有文库均使用同一延伸时间
  • 文库定量结果可以通过 NEB 在线工具 NEBioCalculator.neb.com 轻松计算
  • 试剂盒中包含 ROX，方便需要参照染料的 qPCR 仪器进行标准化

每套试剂均通过 qPCR 文库定量分析进行功能验证。试剂通过功能测试，遵守严格检测效率标准及每个 DNA 标准品的 Cq 值和无模板对照反应。

图 2：NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®）工作流程

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图 3：qPCR 法提供比 Bioanalyzer® 分析更一致的文库定量结果

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使用 NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®）（橙色）测定 4 个文库的浓度，并与使用 Agilent Bioanalyzer（蓝色）测定的结果进行比较。与基于 qPCR 的 NEBNext 方法相比，Bioanalyzer 所测定的结果呈现出更大幅度的变化。
图 4：使用 NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®）可显著提高文库定量的可重复性

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4 位用户分别使用 NEBNext 或 KapaTM 文库定量试剂盒（通用），对三个 340 – 400 bp 的文库进行定量，重复 2 – 4 次。与 Kapa 试剂盒（灰色）相比，NEBNext 试剂盒（橙色）对文库浓度定量的一致性有显著改善。
图 5：使用 NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®），标准品的批间差更小、更稳定

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精准的 qPCR 定量需要用已知浓度的高质量的 DNA 标准品。NEBNext 文库定量试剂盒包含 6 个标准品，具有极高的定量准确度和一致性。图中显示了 4 个批次的 NEBNext（橙色）和 Kapa（灰色）标准品 > 70 次运行的总实验数据，并绘制了所有 Cq 值。框和点分别代表平均值和四分位数。NEBNext 文库标准品的 Cq 值变化更小，说明具有更高的文库定量一致性。
图 6：使用 NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®）定量值可获得最佳簇密度

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使用 NEBNext 文库定量试剂盒（橙色）或 Kapa 文库定量试剂盒（通用）（对色）对 7 个不同的文库进行定量。未稀释的文库浓度范围为 2 – 200 nM。将文库稀释至 8 pM 并在 MiSeq® 仪器（v2 化学；MCS v2.4.1.3）上样。使用 NEBNext 试剂盒定量后，文库的原始簇密度平均值为 1,160 k/mm2，在最佳范围 900 – 1,300 k/mm2 内。相比之下，基于 Kapa 定量的文库平均值只有 660 k/mm2。
图 7：使用 NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina®），可以从具有广范的文库大小和 GC 含量的量化文库中获得最佳簇密度

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使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量来自指定来源的 310–963 bp 的文库，然后稀释至 8 pM 并在 MiSeq 仪器（v2 化学；MCS v2.4.1.3）上样。文库浓度范围为 7 – 120 nM，文库的原始簇密度为 965 – 1,300 k/mm2（ave. = 1,199）。使用 NEBNext 文库定量试剂盒定量的文库大小浓度，都获得最佳簇密度。
图 8：通过广泛的文库大小和 GC 含量实现准确的文库定量
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使用 NEBNext 文库定量试剂盒成功定量一系列文库。按由小到大绘制，小至 150 – 230 bp（sRNA、FFPE），大到 980 bp。使用多种样本来源，GC 含量在 20-70% 之间，图中文字使用不同颜色显示。分别使用 NEBNext、Illumina TruSeq® Nano 和 Kapa Hyper 文库制备试剂盒制备（数据未显示）文库。结果显示，使用 NEBNext 进行文库定量不依赖于大小或 GC 含量。
产品类别:
NGS Library Quantitation Products,
Next Generation Sequencing Library Preparation Products

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E7630S     -20    
        NEBNext® Library Quant Master Mix E7640AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
        NEBNext® Library Quant Primer Mix E7639AVIAL -20 1 x 0.1 ml Not Applicable
        NEBNext® Library Dilution Buffer E7633AVIAL -20 2 x 1 ml 10 X
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 1 E6886AVIAL -20 1 x 0.024 ml 100 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 2 E6887AVIAL -20 1 x 0.024 ml 10 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 3 E6888AVIAL -20 1 x 0.024 ml 1 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 4 E6889AVIAL -20 1 x 0.024 ml 0.1 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 5 E6890AVIAL -20 1 x 0.024 ml 0.01 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 6 E6891AVIAL -20 1 x 0.024 ml 0.001 pM
        ROX (High) E7641AVIAL -20 1 x 0.02 ml Not Applicable
        ROX (Low) E7638AVIAL -20 1 x 0.02 ml Not Applicable
    • E7630L     -20    
        NEBNext® Library Quant Master Mix E7640AAVIAL -20 1 x 7.5 ml Not Applicable
        NEBNext® Library Quant Primer Mix E7639AAVIAL -20 1 x 0.5 ml Not Applicable
        NEBNext® Library Dilution Buffer E7633AAVIAL -20 2 x 7.5 ml 10 X
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 1 E6886AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 100 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 2 E6887AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 10 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 3 E6888AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 1 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 4 E6889AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 0.1 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 5 E6890AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 0.01 pM
        NEBNext® Library Quant DNA Standard 6 E6891AAVIAL -20 1 x 0.12 ml 0.001 pM
        ROX (High) E7641AAVIAL -20 1 x 0.1 ml Not Applicable
        ROX (Low) E7638AAVIAL -20 1 x 0.1 ml Not Applicable

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • 无核酶水
    • qPCR 仪器
    • qPCR 板和密封件
    • PCR 联管或微型离心管
    • 锥形离心管

  • 优势和特性

    Features

    • 与其它方法和试剂盒相比，可提供更精准和可重复的定量结果
    • 兼容于通过多种方法制备的具有宽范围插入片段大小及 GC 含量的文库
    • 可根据实验需求灵活选择最佳标准曲线（4 个或 6 个标准品）
    • 提供使用方便的文库稀释缓冲液
    • NEBNext 文库定量预混液只需要加入引物
    • 无论插入片段大小如何，所有文库均使用同一延伸时间
    • 文库定量结果可以通过 NEB 在线工具 NEBioCalculator.neb.com 轻松计算
    • 试剂盒中包含 ROX，方便需要参照染料的 qPCR 仪器进行标准化

  • 相关产品

    相关产品

    • NEBNext® 文库稀释缓冲液
    • E7642 NEBNext 文库定量 DNA 标准品

  • 注意事项

    1. 试剂盒组份的贮存方法：
      NEBNext 文库定量试剂盒（Illumina）的所有单独组份均可在 –20℃ 条件下稳定贮存两年。未使用时，试剂盒组份应于 –20℃ 条件下贮存。该试剂盒的所有组份（包括 NEBNext 文库定量预混液和引物混合液）至少经历 30 次反复冻融都能保持稳定。

      一旦将引物混合液添加到 NEBNext 文库定量预混液中后（请参阅手册第 6 页的“操作说明”），所得混合液可在 –20℃ 条件下贮存七个月。如需短期贮存，该混合液可在 4℃ 条件下贮存最多六周。

      可在室温条件下配制反应，但试剂盒中未使用的试剂在解冻后应放在冰上使用。

    2. 对于提供的试剂：

      除试剂盒中提供的稀释缓冲液以外，如果您还需要稀释缓冲液，可以单独购买。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Where can I find protocols for using the NEBNext Library Quant Kit?

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE7630_E7642

  • 应用实例

    • Improved library quantitation for a broad range of library types using the NEBNext® Library Quant Kit for Illumina®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How are the new 6 standards different from the old 4 standards?
    2. What are the advantages of the qPCR-based NEBNext Library Quant Kit compared to other methods of quantitating NGS libraries?
    3. What libraries can be quantitated with the Quant Kit?
    4. How much should I dilute my library to run in the Quant Kit?
    5. Can I run the NEBNext Library Quant Kit on my qPCR machine?
    6. Which ROX should I use for my qPCR machine?
    7. Are 4 standards enough for a qPCR quantitation?
    8. Does the library quant require a size correction?
    9. What other materials/information do I need to run the kit?
    10. How many libraries can I quantitate at a time?
    11. How long is a run of the Quant Kit?
    12. Do you provide any analysis tools to help with the quantitation?
    13. Can I see adaptor dimers as a measure of library quality?