热稳定 USER® III 酶 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

热稳定 USER（尿嘧啶-特异性切除试剂）III 酶在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。热稳定 USER III 酶是 Afu 尿嘧啶-DNA 糖基酶（UDG）和有 DNA 糖基酶-裂解酶活性的核酸内切酶 IV的混合物。Afu UDG 可催化切除尿嘧啶碱基，形成一个脱碱基（脱嘧啶）位点，同时保持磷酸二酯骨架结构完整。核酸内切酶 IV 的裂解酶活性使脱碱基位点 3′ 和 5′ 端的磷酸二酯骨架断裂，从而释放无碱基的脱氧核糖，并产生 5′-脱氧核糖磷酸基（dRP）和 3′-羟基。热稳定 USER III 酶也具有 3′-二酯酶活性，可去除 3′ 磷酸、3′-α、β-不饱和醛、磷酸糖醛和其它 3′ 封闭基团。热稳定 USER III 酶在 50 – 75℃的条件下具有活性（在 65℃ 条件下观察到最佳活性）。

图 2：USER 酶（NEB #M5505）、热敏 USER II 酶（NEB #M5508）和热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）在 DNA 切割后产生不同的功能性末端产物。

热稳定 USER® III 酶 |

除了最佳反应温度不同（USER 和热敏 USER II 酶为 37℃，热稳定 USER III 酶为 65℃）以及热失活能力不同（仅限热敏 USER II 酶），不同的 USER 酶还会在切割后产生不同的 3’ 和 5’ 末端产物。USER 酶（NEB #M5505）包含核酸内切酶 VIII，在切割后产生 3’ 和 5’ 磷酸基团。热敏 USER II 酶（NEB #M5508）包含核酸内切酶 III，在切割后产生 3′-磷酸-α、β-不饱和醛和 5′ 磷酸基。热稳定 USER III 酶（NEB #M5509）包含核酸内切酶 IV，并产生 3′-羟基和 5′-脱氧核糖磷酸基。

来源：

这两种组分蛋白分别从大肠杆菌菌株纯化获得，菌株携带编码核酸内切酶 IV 和 Afu UDG 的质粒。

 
产品类别:
DNA Repair Enzymes and Structure-specific Endonucleases Products

应用:
DNA Assembly and Cloning,
High-throughput cloning and automation solutions

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • M5509S     -20    
        Thermostable USER® III Enzyme M5509SVIAL -20 1 x 0.05 ml 1,000 units/ml
        ThermoPol® Reaction Buffer B9004SVIAL -20 1 x 1.5 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    1 单位是指在 1X Thermopol 缓冲液中，65℃ 条件下，当总反应体系为 10 µl 时，15 分钟能切刻 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 60 mer 荧光标记的双链寡核苷酸所需的酶量。

    反应条件

    1X ThermoPol® 反应缓冲液
    Incubate at 65°C

    1X ThermoPol® 反应缓冲液
    20 mM Tris-HCl
    10 mM (NH4)2SO4
    10 mM KCl
    2 mM MgSO4
    0.1% Triton® X-100
    (pH 8.8 @ 25°C)

    贮存溶液

    15 mM Tris-HCl
    35 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM
    100 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

  • 优势和特性

    Features

    • 热稳定
    • 产生 3′-OH 和 5′-dRP（与 USER 酶或热敏 USER II 酶产生的末端不同）
     

  • 相关产品

    单独销售的组分

    • ThermoPol® 反应缓冲液套装

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Thermostable USER® III Enzyme Standard Protocol (M5509)

工具 & 资源

  • Web 工具

    • NEBioCalculator®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. What is the activity of Thermostable USER® III Enzyme in other buffers?
    2. What temperature is Thermostable USER® III Enzyme active?
    3. How is Thermostable USER® III Enzyme different than USER Enzyme and Thermolabile USER II Enzyme?
    4. Will Thermostable USER® III Enzyme remove uracil from ssDNA and dsDNA?