SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒采用环介导等温扩增（LAMP）技术检测 SARS-CoV-2 病毒核酸。本试剂盒仅供研究使用，其中包括含 UDG 的 WarmStart LAMP 2X 变色预混液，以及以病毒基因组中 N 和 E 区域为靶标的混合引物。为验证检测性能，我们还提供对照品，包括内部对照引物组和阳性对照模板。研究发现，盐酸胍可提高 RT-LAMP 反应的速度和灵敏度，因而也包括在内。

 

图 1：SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒组分

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒包括含 UDG 的 WarmStart LAMP 2X 变色预混液，以及以病毒基因组中 N 和 E 区域为靶标的混合引物。为验证检测性能，我们还提供对照品，包括内部对照引物组和阳性对照模板。研究发现，盐酸胍可提高 RT-LAMP 反应的速度和灵敏度，因而也包括在内。

图 2：SARS-CoV-2 基因组与 SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒靶基因

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒包含以 N 和 E 基因区域为靶标的混合引物。

含 UDG 的 WarmStart LAMP 2X 变色预混液是由 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶在特殊的低缓冲力反应溶液中优化形成；该反应溶液包含可视化 pH 指示剂，使检测 LAMP 和 RT-LAMP 的结果判定更加简单、快捷。预混液中包含的热敏 UDG 和 dUTP 可有效减少反应间的交叉污染。
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本系统提供了一种快速且清晰的可视化扩增检测方案，其原理为 DNA 聚合酶在 LAMP 扩增反应中产生大量质子，继而引发 pH 值下降，pH值的下降使反应液颜色从粉红色变为黄色。总操作时间为 30 分钟，只需可加热至 65℃ 的简易加热设备。
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SARS-CoV-2 RNA 序列的阳性检测结果将显示为黄色（出现扩增、产生质子、 pH 值改变导致的从粉红色到黄色的颜色变化），而阴性检测结果将显示为粉红色（未出现扩增、未产生质子、无颜色变化）。
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图 3：SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒实验流程

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

在 SARS-CoV-2 变色 LAMP 检测试剂盒中，每个测试样品都会设置三次对照反应。所有反应在温育前均应呈粉红色。按照提供的方案操作，无模板对照（NTC）反应将包含除测试加入的核酸本身外的测试所有所需材料（预混液、引物等），用来监测反应污染和基于引物的错误扩增。NTC 样品不会扩增，在整个实验过程中应呈粉红色。阳性对照（PC）将包含预混液、含有 SARS-CoV-2 N 基因（GenBank：MN908947.3）的质粒以及扩增此序列的引物。PC 中应能观察到扩增，样品应在温育后变为黄色。内部对照（IC）将包含预混液、测试加入的核酸以及 rActin（一种内源性管家基因）的 LAMP 引物。如果试剂为活性试剂且样品处理得当，则 IC 会在温育后变为黄色。

图 4：SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒支持按需、高通量检测实验流程

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒可支持不同的实验流程，每个实验流程随推荐的对照反应数量而异。对于低通量、按需检测，每次检测需要 4 个反应：3 个对照（NTC、PC 和 IC）与 1 个检测样品。若将此试剂盒用于此应用场景，相当于每个 NEB #E2019S（96 次反应）试剂盒 可用于24 个样品的检测。对于高通量应用场景，在分析样板时，每个样板只需使用 1 个 NTC 和 1 个 PC（建议每个检测样品使用一个 IC）。若将此试剂盒用于此应用场景，相当于每个 NEB #E2019S（96 次反应）试剂盒 可用于47 个样品的检测。

图 5：快速简单的变色法 SARS-CoV-2 RNA 检测

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

SARS-CoV-2 LAMP快速变色检测使用指定的对照样品以及阳性样品（人总 RNA 混入合成 SARS-CoV-2 RNA）或阴性样品（人总 RNA）。显示了无模板对照（NTC，粉红色）、阳性对照（PC，黄色）和内部对照（IC，黄色）的有效结果。在阳性检测样品中，SARS-CoV-2 RNA 等温扩增后，颜色将由粉红色变为黄色。

图 6：强大的灵敏度和特异性

SARS-CoV-2 LAMP 快速变色检测试剂盒 |

如图所示，SARS-CoV-2 LAMP快速变色检测采用阳性样品 （人总 RNA 混入 合成 SARS-CoV-2 RNA，每次反应 5,000、500 或 50 拷贝）、阴性样本（人总 RNA）或无模板对照（NTC）。A.所有阳性样品均显示阳性结果，颜色明显从粉红色变为黄色，包括以反应中 50 拷贝的低起始量在内的所有样品的检测（n = 20）。B.所有阴性样品均未出现颜色变化（n = 32）。C.三位实验人员在总共 9 次实验中所进行类似测试的结果汇总。在单次反应 50 拷贝的检测中，>95%（277/288）的反应显示阳性（黄色）。在阴性样品中，>99%（358/360）的反应没有颜色变化（粉红色），其余反应（2/360）出现局部颜色变化（橙色，如实验人员 2 和 3 的星号所示）。

世界各地的科学家已在新型实验流程中采用 LAMP 对 COVID-19 进行进一步研究。如需参阅操作说明书、选定的预印本，以及了解有关 NEB 新冠病毒（COVID-19）研究聚焦系列的更多信息，请点击此处。

产品类别:
Isothermal Amplification & Strand Displacement Products,
PCR, qPCR & Amplification Technologies Products

应用:
Loop-Mediated Isothermal Amplification,
Isothermal Amplification,
DNA Amplification, PCR & qPCR

  • 试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E2019S     -20    
        WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix with UDG M1804SVIAL -20 1 x 1.32 ml 2 X
        SARS-CoV-2 Positive Control (N gene) N2117SVIAL -20 1 x 0.05 ml Not Applicable
        Control LAMP Primer Mix (rActin) S0164AVIAL -20 1 x 0.14 ml 10 X
        SARS-CoV-2 LAMP Primer Mix (N/E) S1883AVIAL -20 1 x 0.22 ml 10 X
        Nuclease-free Water B1502AVIAL -20 1 x 1.5 ml Not Applicable
        Guanidine Hydrochloride B2619AVIAL -20 1 x 0.75 ml 10 X

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    一次性无粉手套以及必要的配套 PPE

    P2/P10、P200 和 P1000 气溶胶屏障吸头

    1.5 ml 无菌、无核酸酶微量离心管

    2.0 ml、5.0 ml 或 15 ml 无菌、无核酸酶离心管

    带分体式管和管盖（例如 VWR 20170-004）或带连体式管盖（例如 VWR 20170-010）的 0.2 ml PCR 反应联管，或带 8 联管盖的 96 孔 PCR 反应板

    适用于 1.5 ml 微量离心管和 96 孔 0.2 ml PCR 反应管的管架

    适用于 1.5 ml 微量离心管和 96 孔 0.2 ml PCR 反应管的冷却架

    可接受的表面去污剂，例如：10% 的漂白剂（1:10 稀释的 5.25 – 6.0% 商用次氯酸钠）

    实验室记号笔

    适当的处置容器

    呈现变色反应最佳可视化效果的白纸或浅色背景（例如，常见的打印纸）

    微量移液枪（2 或 10 μl、200 μl 和 1,000 μl）、多通道微量移液枪（5-50 μl）

    -20℃ 冰箱（无霜），4℃ 冰箱

    可设定为 65℃ 的热循环仪、加热块或设备

    PCR 工作站 [紫外线灯；层流（100 级 HEPA 过滤）]、涡旋混合器、台式微型离心机

  • 优势和特性

    Features

    • 30 分钟等温实验流程 – 无需复杂的实验室设备
    • 可视化变色检测 – 操作方便，结果简单易读
    • 预混液包含的 UDG 和 dUTP 可防止交叉污染 – 减少污染风险
    • 经优化的、靶向两个基因的混合引物 – 提高检测能力和灵敏度
    • 双重 WarmStart 剂型 – 可在室温下建立反应体系
    • 包括必要的对照 –用以验证检测性能，提高结果可信度

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  • 注意事项

    1. 防止交叉污染

      LAMP 是一种灵敏的 DNA 扩增方法，在新的 LAMP 实验中，之前扩增反应的产物污染会导致各种问题，例如假阳性结果和灵敏度降低。防止这种“交叉”污染的最好办法就是严格按照实验程序操作，避免扩增后打开反应容器。不过，为进一步满足预防污染的要求，含 UDG 的 WarmStart LAMP 变色预混液中包含了 dUTP/dTTP 混合物，可在扩增过程中将 dU 掺入到 DNA 产物中。变色混合液中含有的南极热敏尿嘧啶 DNA 糖基化酶（UDG），可以通过切除尿嘧啶碱基去除先前扩增的含尿嘧啶产物，从而产生不可扩增的 DNA 产物。使用热敏 UDG 至关重要，因为需要将 UDG 快速完全灭活，防止其破坏新合成的 LAMP 产物。要最大限度地消除污染产物，可在室温下进行 LAMP 变色实验或在进行等温温育之前，在 25℃ 条件下温育 10 分钟。

    2. 反应体系建立与等温温育

      含 UDG 的 LAMP 变色预混液具有双重 WarmStart 功能，可在室温下建立反应体系。在室温下建立反应体系还将有助于 UDG 破坏先前生成的含 dU 的 LAMP 产物。

    3. 推荐使用 25 μl 最终反应体积。
    4. 为实现最高灵敏度，可将反应样品从室温直接放置在温度为°65℃的预热块上。当反应温度升至°65℃ 时，则不能继续把反应放置在预热块上。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Detection Assay Protocol (NEB #E2019)

  • 说明书

    产品说明书包含产品使用的详细信息、产品配方和质控分析。

    • manualE2019

  • 应用实例

    • Optimizing rapid isothermal workflow for SARS-CoV-2 with WarmStart® LAMP with UDG
    • Detection of the Omicron variant mutation at position 26,270 in the SARS-CoV-2 E gene using the SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit

工具 & 资源

  • Web 工具

    • NEB LAMP Primer Design Tool

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. How does the new Omicron variant impact the effectiveness of the SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit?
    2. Can the Colorimetric LAMP 2X Master Mix be used in instruments that utilize fluorescent detection of DNA amplification or real time turbidity measurement?
    3. How stable are the WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mixes?
    4. The WarmStart LAMP Master Mix has some precipitation in the tube after thawing, is this normal?
    5. What if my colorimetric LAMP mix is orange instead of pink prior to amplification?
    6. Does the WarmStart® Colorimetric LAMP Master Mix with UDG enable carryover prevention/contamination reduction?
    7. Does pre-heating the thermal block impact LAMP amplification reactions?
    8. What regions of the SARS-CoV-2 virus do the LAMP Primers target? How were these primers chosen?
    9. In the SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit, what is the target of the Internal Control Primer Mix (rActin)?
    10. Should I use Guanidine HCl (B2619A) in colorimetric LAMP reactions?
    11. How are colorimetric LAMP results interpreted in the SARS-CoV-2 Kit?
    12. After amplification my samples turned orange rather than yellow. Is this acceptable? How do I interpret the results?
    13. Can I incubate my colorimetric LAMP Sars-CoV-2 samples longer than 30 minutes at 65°C? How long should I incubate the reaction before checking the results?
    14. My NTC sample(s) turned orange/yellow following incubation at 65°C. What happened?
    15. My colorimetric LAMP SARS-CoV-2 Positive Control failed to turn yellow following incubation at 65°C. What happened?
    16. What is the SARS-CoV-2 Positive Control included in the kit?
    17. How much sample can be added to the colorimetric LAMP reaction as input?
    18. What types of samples/materials are compatible with the SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit?
    19. My SARS-CoV-2 sample or Internal Control reaction turned orange/yellow upon sample addition. Does that mean that the sample contains nucleic acid?
    20. What instruments are compatible with the SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit?
    21. Can I monitor the color change of the colorimetric LAMP reactions using a spectrophotometer?
    22. Can the WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mixes be used in instruments that utilize fluorescence detection?

  • 问题解决指南

    • Troubleshooting Guide for use with SARS-CoV-2 Rapid Colorimetric LAMP Assay Kit (NEB #E2019)