ApoI |NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品信息

本酶提供高保真版 ApoI-HF®（NEB #R3566）

高保真（HF）限制性内切酶在 rCutSmart 缓冲液中具有 100% 活性；统一缓冲液意味着更加直接、简化的样品处理过程。HF 内切酶还会显著降低星号活性。所有 HF 内切酶均符合省时酶（Time-Saver）标准，可在 5-15 分钟内酶切底物 DNA，也可实现过夜酶切而不会造成 DNA 降解。HF 限制性内切酶在开发时便将性能作为重要指标，可在更宽的条件范围下具有完全活性，最大限度地减少非特异性酶切产物，同时为实验设计提供灵活性。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带有克隆自原玻璃蝇节杆菌（Arthrobacter protophormiae）（C. Polisson）的 ApoI 基因。

产品类别:
Discontinued (<3 years)

  • 产品组分信息

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • R0566V     -20    
        ApoI R0566VVIAL -20 1 x 0.05 ml 10,000 units/ml
        NEBuffer™ r3.1 B6003SVIAL -20 1 x 1.25 ml 10 X

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，50℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer™ r3.1
    Incubate at 50°C

    1X NEBuffer™ r3.1
    100 mM NaCl
    50 mM Tris-HCl
    10 mM MgCl2
    100 µg/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25°C)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer™ r1.1: 10%
    NEBuffer™ r2.1: 75%
    NEBuffer™ r3.1: 100%
    rCutSmart™ Buffer: 75%

    稀释兼容性

    • 稀释液 A

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    80°C for 20 minutes

    甲基化敏感性

    dam 甲基化: 不敏感
    dcm 甲基化: 不敏感
    CpG甲基化: 不敏感

    在不同温度下的活性

    @37°C: 50%

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  • 注意事项

    1. 该酶切割产生一个 5´ AATT 的突出端，能与 EcoRI 消化的 DNA 片段连接。
    2. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。

操作说明、说明书 & 用法

  • 操作说明

    1. Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    2. Restriction Digest Protocol
    3. Double Digest Protocol with Standard Restriction Enzymes

  • 使用指南

    • Activity at 37°C for Restriction Enzymes with Alternate Incubation Temperatures
    • Activity of Restriction Enzymes in PCR Buffers
    • Cleavage Close to the End of DNA Fragments
    • Dam and Dcm Methylases of E. coli
    • Digestion of Agarose-Embedded DNA: Info for Specific Enzymes
    • Double Digests
    • Heat Inactivation
    • NEBuffer Activity/Performance Chart with Restriction Enzymes
    • Optimizing Restriction Endonuclease Reactions
    • Restriction Endonucleases – Survival in a Reaction
    • Restriction Enzyme Diluent Buffer Compatibility
    • Restriction Enzyme Tips
    • Single Letter Codes
    • Star Activity
    • Traditional Cloning Quick Guide

工具 & 资源

  • 选择指南

    • Alphabetized List of Recognition Sequences
    • Cleavage of Supercoiled DNA
    • Compatible Cohesive Ends and Generation of New Restriction Sites
    • Dam-Dcm and CpG Methylation
    • Enzymes with Multiple Recognition Sequences
    • Frequencies of Restriction Sites
    • Isoelectric Points (pI) for Restriction Enzymes
    • Isoschizomers
    • NEB Diluent and Buffer Table
    • Time-Saver™ Qualified Enzymes
    • Why Choose Recombinant Enzymes?

  • Web 工具

    • Competitor Cross-Reference Tool
    • DNA Sequences and Maps Tool
    • Double Digest Finder
    • Enzyme Finder
    • NEBcutter™ v3.0
    • NEBioCalculator®
    • REBASE®

FAQs & 问题解决指南

  • FAQs

    1. Does EcoRI methylase block ApoI?
    2. Do degenerate recognition sites need to be palindromic?
    3. Do I have to set-up digests with Time-Saver™ qualified enzymes for 5-15 minutes? Can I digest longer?
    4. Is this enzyme sensitive to dam, dcm or mammalian CpG methylation?
    5. Can you tell me more about the switch from BSA to Recombinant Albumin (rAlbumin) in NEBuffers?

  • 问题解决指南

    • Restriction Enzyme Troubleshooting Guide